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. Word文档 鸡 的 切 片 制 作 实 验 报 告 实验三 病变组织的取材、固定和修块 一.实验目的 掌握用于病理组织学诊断的组织材料的取材原则，固定方法及修块标准。 二．实验耗材 手术刀、组织剪、刀片、生理盐水、多聚甲醛固定液（福尔马林）、铅笔等。 三．实验过程 1.取材：用颈部放血法处死公鸡，打开腹腔，取需要的组织。切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm*5mm*2mm或10mm*10mm*2mm为宜。取下所需的组织，切成一小块2-3mm厚。 注意：取材动作要迅速。不宜做太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化，不要损伤所需要的部分。 固定：将切好的内脏组织用 生理盐水把组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定。 （固定的作用） 组织经一系列的处理后，就必须进行固定。 固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度，固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。 3. 修块 样品要求：长，宽各1cm左右，厚不宜超过1cm（依据组织不同要求不同）。 肝、肾、脾、肺、肌肉、消化道、脑 其他注意 （1）组织固定越新鲜越好。组织一经离体，就能及时地固定，这是最好的。 （2）固定材料时，固定液必须充足，一般材料块的20-30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。 （3）组织固定，组织块不宜过大。对于产酶类的器官如肝、肾、脾等，更要处理好，否则更容易出现自溶现象。 （4）对不同类型的组织应适当合理地选择固定液。 （5）组织固定，时间不宜太短，也不宜太长。 （6）特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液。一般的病例标本，如没特殊的要求，都可以应用甲醛配成的各种固定液来固定。但是，如果要显示狂犬病毒的包含体时，应用上述的的固定液就不行了，必须采用丙酮来固定，显示糖元，可选择无水酒精或丙酮来固定组织。 （7）有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才能混合，如果混合太早，固定就没作用了。如Zenker液（一种核固定剂），最适合于造血和网状内皮组织的固定。 实验四 组织的脱水处理 一．实验目的 掌握组织脱水的目的和原理，及在实验过程中的注意事项。 二．实验耗材 75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ。 三、实验步骤 原理： 用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。 脱水概念：把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。 （脱水过程） 1、水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。 2、脱水 1）75%酒精 12h 2) 85%酒精 6-8h 3）95%酒精 12h 4) 100%酒精 Ⅰ 2h 5) 100%酒精 Ⅱ 2h 组织块在进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，所有过程要在瓶口加盖，防止水分子进入。 （脱水的基本原则） 从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分完全脱净。一般1cmX1cmX0.2cm大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全脱水。在各级浓度酒精内处理的最短时间分别减少到2—4小时也能获得满意的结果。 但是有时为了某种特殊要求，例如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过程。经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。 注意事项：? （1）脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。? （2）在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。? （3）在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。? （4）在高浓度或纯酒精中，每级停留