生化基础知识比色法.pptxVIP

比色法原理(分光光度法)多么美丽五彩斑斓的春天啊 为什么上述溶液呈现不同的颜色？自然光-赤橙黄绿青蓝紫波长决定颜色光谱-连续不同波长光的集合物质对不同波长光的选择性吸收　由于物质对不同波长光的选择性吸收而引起，物质呈现的是被吸收颜色的互补色。单色光互补光复色光 现在知道她的秘密了吗？脑筋急转弯1、红光照射红色溶液，看透过什么色？2、红光照射绿色溶液，看透过什么色？透光度定义：全部吸收T = 0.0 %全部透过T = 100.0 %吸光度定义：透光度 （透射比）TransmittanceT 取值为0.0 % ~ 100.0 %T、A与颜色的关系－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 透光率（T） 吸光度（A）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 1 0.000 0.75 0.125 0.5 0.301 0.25 0.602 0.17 0.770 0.1 1.000 0.05 1.301 0.01 2.000 0.001 3.000－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ ？测量物质光吸收的装置-比色计 比色计或分光光度计物质的光吸收曲线-定性分析吸光度与光径的关系吸光度与浓度的关系朗伯-比尔定律： A=-lgT=KCL透光度（transmittance，T，透射率） T＝It / I0吸光度（absorbance，A）光密度（optical density，D或OD） A ＝-lgT ＝ lg I0/ItLamb-beer定律：A＝KCL K为吸光系数，C为浓度，L为光径cm摩尔吸光系数ε:当C＝1mol/L，L＝1cm，A= ε比色定量——与标准浓度物质溶液比较目视比色法观察方向c1c2c3c4空白 比色计或分光光度计比色法成立的基础有色或有吸收单色光让我们欣赏这幅雪山夕照：在巍峨的雪山脚下,生长着大片的白桦林,黄黄的树叶还在风中摇曳。平如明镜的湖面上天光云影共徘徊。美丽的色彩，告诉我们秋天到了。那么，有谁能告诉我，万物为什么有这么丰富的色彩？换句话说，就像这两杯溶液为什么会呈现不同的颜色？发问的是牛顿。就是树上掉下一个苹果，发现了万有引力的牛顿（换了是我们，捡到一个苹果，望望，擦擦，吃了，不吃白不吃）。1666年牛顿凿壁偷光，做了这个试验…………让我们知道太阳光是赤橙黄绿青蓝紫不同颜色的混合光，他大胆推论——万物呈现颜色肯定与这个现象有关。接下来，牛顿继续试验，测量不同颜色光的波长……发现原来赤橙黄绿青蓝紫就是光的波长和能量不同而已。把不同波长的光的连续谱线，就叫光谱。把肉眼可见的光线称为可见光。可见光只占光谱的很窄部分(400nm到760nm)。在这个范围里，不同波长的可见光具有不同的颜色。波长大于760nm的光线称为红外线。波长小于400nm的光线称为紫外线。 接下来，牛顿继续试验，测量不同颜色光的波长……发现原来赤橙黄绿青蓝紫就是光的波长和能量不同而已。把不同波长的光的连续谱线，就叫光谱。把肉眼可见的光线称为可见光。可见光只占光谱的很窄部分(400nm到760nm)。在这个范围里，不同波长的可见光具有不同的颜色。波长大于760nm的光线称为红外线。波长小于400nm的光线称为紫外线。 光的颜色与物质之间到底有什么关系？牛顿打破砂锅问到底，……发现红色高锰酸钾溶液选择性吸收了白光中绿光，自身呈现出红色。那么，这种自然现象到底有何规律？大量的试验证明……物质的颜色，是由于……秘密在于选择性吸收了自然光中某一波长的光，而呈现出其互补色，这这两杯溶液呈现不同颜色的原因，就是这个美丽的大自然五光十色的原因。好了，请回答下面的问题。1、随着这方面知识的积累，人们希望能用数学模型来解释“物质选择性光吸收”的自然现象。这样可以知道物质到底吸收了多少光？2、解释透光度；3、那么我问一下，剩下的光哪去了？……这部分光就是被物质吸收掉了，那么这个值就是吸光度。它等于透光度的负对数。也就是透光度大，吸光度小；反之，……。吸光度的概念用来量化物质选择性吸收光的能力。T与A是负对数