实验三_葡聚糖凝胶柱层析纯化蛋白质.pptxVIP

实验二、葡聚糖凝胶柱层析;1、目的与要求：;2、概述及原理：;2.1、能用于层析的凝胶主 要有下面几种：;交联葡聚糖凝胶 ：;2.2、不同型号的葡聚糖凝胶　(Sephadex) 的选用原则： 　　;2.3、凝胶层析法的原理：;;层析柱的重要参数 ： 　　Vt(total volume)　 Vo(outer volume) 　　Vi(inner volume)　 Ve(elution volume) 　　Vg(gel volume) 　　Vt=Vo+Vi+Vg , 　　Ve=Vo+Kd×Vi。 ;组分的洗脱体积（Ve）：①当样品的体积很少时（与洗脱体积比较可以忽略不计） ，在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 ②当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。③当样品体积很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。 ;Kd是分配系数：用于衡量两个物质的分离分辩率，是凝胶层析的一个特征常数，只与被分离物质分子大小和凝胶孔径大小有关，与层析柱的长短粗细无关。 Kd值的计算：Kd=(Ve-Vo)/Vi 几个特征Kd值意义： 　　 ①Kd=0,则Ve=Vo ，全排阻； 　　 ②Kd=1,则Ve=Vo+Vi , 全掺入； 　　 ③0＜Kd1,则Ve=Vo+Kd×Vi ，部