3抗体的人源化.pptxVIP

抗体的人源化;一.概念;人源化抗体类型;人－鼠嵌合抗体;人－鼠嵌合抗体;人－鼠嵌合抗体;2.这种嵌合抗体同鼠源抗体比较有以下两个优点： 它可以按需要对抗体的效应基因进行选择或剪切。 在治疗中使用人而不是鼠mAb的同种型，大大减小了鼠源mAb作为异种蛋白对人体的免疫原性，它通过避免抗同种型抗体的产生，减少了HAMA的生成。 ;3.可变区人源化—CDR移植Ab制备原理;CDR是抗体识别和结合抗原的区域，直接决定抗体的特异性。 将鼠源单抗的CDR移植至人源抗体可变区，替代人源抗体CDR，使人源抗体获得鼠源单抗的抗原结合特异性，同时减少其异源性。 抗原虽然主要和抗体的CDR接触，但FR区也常参作用，影响CDR的空间构型。因此换成人源FR区后，这种鼠源CDR和人源FR相嵌的V区，可能改变了单抗原有的CDR构型，结合抗原的能力会下降甚至明显下降。; 4.目前，对CDR移植的人源化路线是： 在鼠/人嵌合抗体的基础上，通过数据库检索、计算机分子模拟等寻找出有最大同源性的人可变区模板，综合考虑表面残基、与CDR有相互作用或对空间结构有重要影响的残基，确定需要保留和改变的关键残基，再通过模拟基因合成，表达检测实际效果，进行必要的修正，来获得高亲和力的治疗mAb。; 5.获得完全人源序列 1994年Jespers等通过噬菌体抗体库技术，首先用抗原表位定向选择法对鼠单抗进行人源化。 我国的王卓智等也采用该方法对抗TNF-a抗体Fab段进行人源化，取得初步成功 ;小分子抗体; 小分子抗体包括：Fab(由完整的轻链和Fd构成)，Fv(由VH和VL构成)，ScFv(单链抗体，VH和VL之间由一连接肽连接而成)，单域抗体(仅由VH组成)，最小识别单位(MRU，由一个CDR组成)以及超变区多肽、双链抗体、三链抗体、微型抗体等几种类型。;;小分子抗体的优点：;Fab;Fab抗体;Fab抗体;FV 片段;Fd段和Fc段;单链抗体ScFv;单链抗体ScFv;双特异性抗体和双功能抗体;重组Fab成功案例;2.结果：经重组表达载体转化的XL12Blue 菌株可表达Fab 基因。 3.总结：应用杂交瘤技术,制备1 株抗人精浆蛋白的单克隆抗体(mAb , E4B7) , 对精浆蛋白具有高度的亲和力,可作为导向载体。但因其为鼠源性mAb , 人体中应用受到限制。为此, 本研究中将鼠源性mAb E4B7 的Fd 基因和К链基因连接, 构建为Fab 基因, 并在大肠杆菌中进行表达, 以制备基因工程抗体, 减少其免疫原性。 ;重组单链抗体(ScFv);目前有两种拼接方法 一种是将接头设计在表达载体上，两端各有限制内切酶供VH和VL的插入。 另一种拼接方法是通过将接头的编码序列分别设计在扩增VH和VL引物中，用PCR直接合成ScFv基因，; 在ScFv中，接头承担了与CL和CH1稳定作用相同的功能，维持VH和VL间的构象。接头必须使重、轻链可变区自由折叠，使抗原结合位点处于适当的构型。;2. 重组单链抗体的表达;(2) 在噬菌体内表达： 一种含有信号肽序列的噬菌体显示系统能用于克隆ScFv，并在大肠杆菌中，使ScFv基因与gpⅢ融合，以融合蛋白的形式表达于丝状噬菌体表面。 通过噬菌体呈现技术(phage display)产生亲和力和特异性更强的ScFv。;3. 重组单链ScFv抗体的应用 由于ScFv分子量小，免疫原性小，且易穿透致密的肿瘤屏障，进入实体瘤周围的微循环，缺乏Fc片段，去除Fc介导的受体结合，使得其快速地向肿瘤集中，因此通过与毒素基因重组，抗体将毒素定位于靶细胞，对靶细胞进行特异杀伤。;人鼠嵌合型基因工程抗体Hm2E8的研究;人鼠嵌合型基因工程抗体Hm2E8的研究;人鼠嵌合型CD19基因工程抗体在Sf9细胞中表达，得到有感染性的完整重组杆状病毒株pAc-κCH3VH_(2E8)VL_(2E8)CV。 以High Five细胞表达重组抗体 表达的重组抗体大多以沉淀形式存在于细胞内