实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法.pptxVIP

基础生物化学实验实验内容安排实验一 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）（P35）实验二 胰蛋白酶抑制剂的分离纯化和活性测定（P40）实验三 酶的基本性质（P85）实验四 酵母核糖核酸的分离与组分鉴定（P159）实验五 PAGE分离过氧化物同工酶（P98）实验六 血液DNA的提取（P162）实验目的熟悉和掌握基本的生物化学实验操作及技能；通过实验加深对生物化学基本理论和概念的理解；培养分析问题和解决问题的能力以及严谨细致的科学作风。 通过实验应该做到掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生化实验仪器。以实事求是的科学态度如实记录实验结果，认真分析并作出客观结论。掌握生物化学的基本实验方法和实验技术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。 实验要求实验前预习准时到实验室实验两人一组，固定座位。进实验室后不乱动实验台上的仪器、试剂动手实验前认真听老师讲解实验原理、实验步骤及实验中需注意的问题。实验课中保持纪律，不随意走动，不大声喧哗，不早退。操作过程要规范，用完物品及时归位。及时记录实验现象，按时上交实验报告。全班分六组，每次实验结束后留一组打扫卫生。实验报告 实验报告是学生实验研究结果的记录和总结，同时也是评价学生实验课成绩的重要依据。 实验报告的格式： 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验方法与步骤 五、实验结果与分析 六、讨论、心得 注意 讨论部分不是对结果的重述，而是实验结果、实验方法和实验异常结果的分析和讨论，以及对实验设计的认识、体会及建议。考核方式与评分方法 采取“学生实验平时考核”的方法进行实验考核。评分方法采用百分制，每个环节都制定了评分标准,各实验项目总成绩的平均值就是实验成绩。 实验成绩＝[∑（预习成绩×10℅＋实验过程成绩×40%＋报告成绩×50℅）]／N 预习报告10℅ 实验过程40℅ 实验报告50℅ N为所做实验项目的总个数基础生物化学实验课评分标准实验课中迟到或早退者其实验过程成绩须扣分。无故不做实验的学生其实验项目成绩评为零分。实验课缺勤超过1/3的学生其实验总成绩评为不及格。在规定的时间内不能按时交实验报告的学生其实验报告成绩须扣分。实验成绩占基础生物化学考试成绩的20℅。实验一 氨基酸的分离鉴定（纸层析法）【实验目的】通过实验，掌握纸层析法的一般原理和操作技术。掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的一般过程。 【实验原理】 层析技术 是一种物理的分离方法，利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷【实验原理】支持物 指层析法中用以支持、容纳样品的物质。支持物的本身或其包含的水、特殊基团在层析中起分离样品物质的作用。如纸层析中的滤纸。固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。流动相 在层析过程因其本身流动而推动样品移动的物质。【实验原理】层析的分类名称操作方式固定相流动相分离依据 分配层析 纸层析 薄层层析液体液体 溶解度 离子交换层析 离子交换柱层析固体液体 带电性 静电引力 吸附层析 吸附薄层层析 气体吸附层析固体液体气体 吸附力 亲合层析 酶与底物 抗原与抗体固体液体 配体专一性 凝胶层析 凝胶过滤固体液体 分子大小【实验原理】 分配层析：是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术。溶质在固定相的浓度分配系数 =溶质在流动相的浓度 【实验原理】 纸层析 是以滤纸作为惰性支持物的分配层析：纸纤维上的 -OH 基具有亲水性，所以能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。流动相流经支持物时与固定相间连续抽提，使物质在两相间不断地分配而得到分离。【实验原理】分配系数不同的溶质移动速率不同。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示： Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离 在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。氨基酸与茚三酮的显色反应。 【仪器和试剂】实验仪器1.电热鼓风干燥箱2.培养皿、青霉素小瓶、毛细管、小型喷雾器3.层析滤纸、滤纸芯实验材料和试剂1.氨基酸溶液 分别配制0.02M的Leu、Val、Pro、Thr、Lys溶液及氨基酸混合液。2.显色剂　0.1%水合茚三酮溶液。3.扩展剂（展层剂）　酸溶剂系统：正丁醇:冰醋酸:水＝4:1:5（体积比）【实验方法与步骤】滤纸的准备 在长度15cm左右滤纸下方2、4cm处画一直线，在4cm处的