实验二pcr扩增乙肝病毒基因及.pptxVIP

分子医学技能杨 霞中山医学院生化教研室yangxia@mail.sysu.edu.cn实验二 PCR扩增乙肝病毒基因及电泳检测 RAPD技术及基因多态性分析RAPD-PCR扩增实验操作课堂设计PCR反应（约3.5h）PCR扩增乙肝病毒基因实验操作上午PCR反应（约2h）琼脂糖凝胶板制备琼脂糖凝胶板制备PCR产物电泳检测（40min）PCR产物电泳检测（40min）结果观察下午一、RAPD－PCR反应（P400）每组3-4人，其中2人用自己基因组DNA做一个随机引物PCR反应，用同学的基因组DNA做模板。（1）PCR反应体系（2）PCR程序 ddH2O15.2 μl10×PCR 缓冲液2.5μl引物1.5μldNTPs2 μlDNA模板3.5 μlTaq DNA聚合酶0.3 μl总体积：25 μl 94℃? 5min（预变性） 94℃?60’’（变性） 38℃?60 ’’ （复性） 共40个循环 72℃?1min（延伸） 72℃?10min（续延伸） 4℃保存 每个同学只需向PCR反应管中加入引物和DNA模板即可放入PCR仪上二、 PCR试剂盒检测HBV DNA 实验操作及注意事项 P26：实验分组（每组做1管待测血清，第1和6组分别做1份阳性模板）?待测血清40ul + 40ul DNA 提取液，混匀?沸水浴10min，10000rpm×5min?待测血清组