《蒽酮-硫酸法测多糖》.docxVIP

蕙酮-硫酸比色法测定多糖含量 一.实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蕙:酮 (C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。 该物质在620 nm处有最大 吸 收，在150 P g/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很 高的灵 敏度，糖含量在30 yg左右就能进行测定。 试剂器材 蕙酮试剂：精密称取0.1g蕙酮，力口 80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。当日 12hr后精密称取 12hr后精密称取100mg , 葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中, 用蒸储水定容至100ml; 其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶 (100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞 试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。 三.操作步骤 爸萄糖标准1111线的制杵 MZ7支具塞试管*按卜表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖洛液 *每个 浓蜃做2? 3个里复匕 管号 0123456 标准葡萄糖济液 mL 0 0 2 0 4 0.6 0.S 1.0 12 蒸诵水 2.0 1.S 16 1.4 1.2 1.0 OS 样品的测定 将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取 2mL置于干燥洁净试管中，在每 支试管中立即加入蕙酮试剂 6mL ,振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加 热 15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷