sds聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量解析.pptxVIP

蛋白质相对分子质量的测定SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法【实验目的】理解电泳法测定蛋白质分子量的原理。掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的基本操作学会绘制标准曲线。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺（Acr）和N，N-甲叉双丙烯酰胺（Bis）聚合而成，是一种具有交叉网状结构的凝胶，可以产生分子筛效应，其孔径大小可以通过配置药品的浓度来控制，常用作电泳的载体。 本实验利用了聚丙烯酰胺凝胶的电泳和分子筛 双重作用。 十二烷基硫酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它的疏水端可以与蛋白质分子结合。绝大多数蛋白质与SDS结合的质量比为1.4:1，使蛋白质带上密度相同的负电荷，其电荷强度远远强于蛋白质原有的电荷，这就掩盖因为蛋白质种类不同而造成的电荷差异，使电泳的迁移率仅与蛋白质的分子量有关。 因此，我们可以测定标准蛋白质的迁移率，通过标准蛋白质相对迁移率的对数对相对分子量作图，得到标准曲线，根据标准曲线计算出未知蛋白质的相对分子质量。 本实验就是依据这个原理进行测定的。【实验器材】DYCZ-24D型垂直板电泳仪移液管若干100mL烧杯微量进样器细长头吸管【试剂配制】1.分离胶和浓缩胶 试剂名称Acr/gBis/g1mol/L盐酸/mL三甲基氨基甲烷（Tris）/g定容体积/mL分离胶贮存液300.8100（棕色瓶，冰箱中保存）分离胶缓冲液4836.3100浓缩胶贮存液100.5100（