高中生物教师实验教学培训-酶PPT课件.ppt

如果将吸附α－淀粉酶的石英砂装柱，使淀粉溶液通过柱时，柱的流出液在加入KI－I2指示剂时可看到溶液呈现红色。 三、实验器材 层析柱，烧杯，玻璃棒，铁架台，白瓷板，α-淀粉酶溶液（0.25g/100ml），石英砂， KI-I2溶液（KI2 2.00g，I2 1.00g溶于100ml水）， 0.1%淀粉溶液（淀粉1.00g溶于1000ml 沸0.3%NaCl溶液） 四.实验步骤 1）用量筒量取10ml α-淀粉酶溶液（0.25g/100ml）、称取5 g石英砂，倒入小烧杯中，缓慢搅拌10 min，使α–淀粉酶充分固定到石英砂上； 2）把固定有α–淀粉酶的石英砂装入层析柱中；往层析柱里加蒸馏水清洗石英砂，取流出液2滴加到白瓷板中，同时滴加1滴0.1%淀粉溶液充分混匀，再加入1滴KI-I2溶液，若溶液变为蓝色，说明层析柱中已无游离α–淀粉酶，如果溶液仍为棕红色，继续用蒸馏水清洗，直至淀粉溶液变为蓝色为止； 3）确认层析柱中已无游离α–淀粉酶后，往层析柱里加0.1%淀粉溶液。 4）在流出1～2 mL反应液后，用试管接收约0.5 mL流出液，加入2滴KI-I2溶液，观察颜色并记录实验结果。 5）实验后 ，用 10 倍柱体积的蒸馏水洗涤固定化酶柱，然后放置在4℃冰箱中，几天后再重复上述实验 ，看是否有相同的结果 。 五、实验结果 样品 水0.5ml 0.1%淀粉溶液0.5ml 滤液0.5ml 2滴KI-I2 参考结果 对照 + - - + 碘色 对照 - + - + 蓝色 样品1 - + + + 蓝色 样品2 - - + + 红色 六.作业与思考 1．如何证明洗涤固定化淀粉酶柱的流出液中没有淀粉酶? 2．耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 3．如何测定木瓜蛋白酶亲和柱水解蛋白质? 中学生物教师实验教学培训——酶 酶（enzyme）是由活细胞产生的生物催化剂，这种催化剂具有极高的催化效率和高度的底物特异性，其化学本质绝大部分是蛋白质。 酶催化作用的特点 酶与一般催化剂的共同点： ①能催化热力学上允许进行的化学反应，而不能实现那些热力学上不能进行的反应； ②一般情况下，对可逆反应的正反两个方向的催化作用相同。 能缩短反应达到平衡所需的时间，而不能改变平衡点. 酶是生物催化剂 酶作为生物催化剂的特点 （一）高效性（具有极高的催化效率）： 酶的催化效率可比一般催化剂高107～1013倍。 如：H2O2 → H2O + O2 H2O2酶、 Fe3+ 催化反应历程 一般化学反应历程： S P 酶促反应历程： S + E ES E + P 反应速率理论与活化能 碰撞理论：有效碰撞 活化分子 活化能 把分子看成是刚性的，未考虑分子内部的结构 过渡态理论 ：不仅要碰撞，而且须经过短暂的过渡态或活化复合体 （二）专一性（具有高度的底物特异性）: 一种酶只作用于一种或一类化合物，以促进一定的化学变化，生成一定的产物，这种现象称为酶作用的特异性。 诱导契合学说 锁钥学说 羧肽酶的诱导契合模式 底物 己糖激酶的诱导契合 （三）作用条件较温和 一般来说，动物体内的酶最适温度在35~40℃，最适pH大多在6.5~8.0 ，但也有例外，如胃蛋白酶的最适pH为1.5；植物体内的酶最适温度在40~50℃之间，最适pH大多在4.5~6.5。 许多因素可以影响或调节酶的催化活性，如代谢物、对酶分子的共价修饰，酶蛋白的合成改变等。 （四） 酶的催化活性是可以调节的： （五）酶易失活： 凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。 （六）某些酶催化活力与辅酶、辅基有关。 如维生素对生理的调节。 酶的命名： 一般采用底物加反应类型，如蛋白水解酶（蛋白酶）、乳酸脱氢酶、磷酸己糖异构酶等 。 酶的分类： 根据酶蛋白分子的特点 单体酶：一条多肽链组成的酶，如溶菌酶、胰蛋白酶； 寡聚酶：由两个或两个以上的亚基组成的酶，如磷酸化酶a ； 多酶复合体：是几种酶靠非共价键彼此嵌合而成，果胶酶。 探究pH对过氧化氢酶的影响 一、实验目的 了解pH对过氧化氢酶的影响 二、实验原理 几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶，特别是植物细胞的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，该酶的活性及其所进行的酶促反应为机体提供了抗氧化的防御机理。 过氧化氢酶的最适 pH为7.0～7.3。pH影响过氧化氢酶的活性，从而影响氧气的生成量，可用生成气体量来测量。 三、实验器材 肝匀浆（小鼠颈椎脱臼，迅速取肝脏，吸去表面血渍，称重，按1: