快速血清学检测技术.ppt

实验三 快速血清学检测技术 什么是血清学检测？ 体外进行的抗原抗体反应，利用已知的抗原检测血清、蛋黄和牛奶中的抗体，或用已知的抗体检测组织或拭子样品中的抗原。 血清学检测包括： 沉淀反应 凝集反应 补体结合反应 血凝和血凝抑制试验 中和试验 免疫标记技术（标记抗体） 免疫标记技术 免疫酶标记技术 免疫荧光标记技术 免疫放射标记技术 免疫胶体金标记技术 （二）实验原理 乳胶凝集试验是以聚苯乙烯乳胶颗粒作为载体，吸附特定的抗原或抗体，当遇到血清中相应的抗体或处理过的病料中相应的抗原时，会形成肉眼可见的凝集颗粒。 乳胶类型 普通乳胶：依靠物理吸附发生致敏。 羧化乳胶：通过化学发应在乳胶颗粒和致敏原之间形成酰氨键，发生化学偶联致敏乳胶，从而更稳定。 双色乳胶：缓冲液和乳胶颗粒为不同的颜色，结果更易于观察。 乳胶凝集试验的特点 1.操作简捷，结果易于判定； 2.敏感性较低； 3.致敏乳胶的稳定性低，保存期短。 乳胶凝集试验的应用 1.病毒性疾病：伪狂犬病毒抗体，乙型脑炎病毒抗体，禽流感病毒和抗体，传染性法氏囊病毒血清抗体 ，鸭呼肠孤病毒； 2.寄生虫疾病：弓形虫等； 3.细菌性疾病：猪萎缩性鼻炎抗体等。 免疫胶体金层析检测A型禽流感病毒 一、实验目的 掌握免疫胶体金层析技术的原理。 掌握胶免疫体金试纸条的使用方法和结果判定。 二、实验原理 胶体金是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。 免疫胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。 免疫胶体金层析技术原理 将特异性的抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上； 当待检样品加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应； 再移动至固定的抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。 三、实验材料 免疫胶体金试纸条 流感病毒（H9亚型）的样品 移液器 枪头 胶体金快速诊断技术的特点 1.简捷快速：操作简单，一般只要5~10min 就会出结果，而其它方法如ELISA需要1~2h， PCR 需要时间更长。 2.结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。 3.特异性好：因为该技术大多用于单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。 胶体金快速诊断技术的应用 1.病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。 2.寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。 3.细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。 思考题 如何通过免疫胶体金层析技术检测H5或H9亚型禽流感病毒？ * * 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验方法 五、注意事项 六、结果判定 乳胶凝集检测乙型脑炎抗体 （一）实验目的 1.了解并掌握乳胶凝集试验的基本原理。 2.掌握乳胶凝集试验检测乙型脑炎病毒抗体的操作方法和结果判定。 （三）实验材料 1.洁净玻片 2.枪头 3. 乙型脑炎病毒致敏乳胶 4. 乙型脑炎阳性、阴性血清 5.被检血清 （四）实验方法 1.在一洁净玻片的3个位置滴加3滴致敏乳胶（每滴约20μl）。 2.用移液器分别取20μl的乙型脑炎病毒阳性血清、阴性血清和被检血清分别滴加到上述3滴致敏乳胶中，并用枪头混匀。 3.轻轻摇晃玻片，使抗原和血清充分混匀，静置1~2分钟，观察结果。 （五）注意事项 1. 取不同试剂时应注意更换枪头，防止交叉污染。 2. 混匀过程中，避免阳性对照、阴性对照和被检样品之间的交叉污染。 阴性 阳性 （六）结果判定 判 定 标 准 ++++ 全部乳胶凝集，颗粒聚集于液滴边缘，液体透明； +++ 大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊； ++ 50％乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊； + 有极少量的凝集，液体呈混浊； - 呈原有的均匀乳状。 ++ ++++ ++++ - ++++ ++++ - ++++ +++ ++++ + — 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料 四、实验方法 五、结果判定 Test Control Conjugate Sample Nitrocellulose Membrane Absorbent Line Line Pad Pad Pad Backing (mAb2) (G-mAb1) (R