临床基因组学检验-—第四章 FISH检测技术广医.pdf

荧光原位杂交技术 (florescence in situ hybridization FISH) 任 玉 霞 renyuxia@ 1 原位杂交 u原位杂交( in situ hybridization, ISH )是应用生物 化学中核酸分子杂交的原理,在组织切片、细胞 涂片上原位检测某种DNA或RNA序列的一项技 术； u原位杂交技术是分子生物学、组织化学及细胞 学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪 60年代； 原位杂交分类 Ø基因组原位杂交技术 Ø荧光原位杂交技术 Ø多色荧光原位杂交技术 Ø原位PCR技术 目录 CONTENTS FISH检测的基本原理 FISH检测的流程 FISH检测的临床应用 荧光原位杂交(FISH) 荧光：利用荧光素标记特异的 DNA片段 （探针）; 原位：染色体原本的位置， 细胞核里， 非经提取的DNA; 杂交：探针与待检测的DNA 区域的特异结合; 荧光标记： 最常用的为生物素、地高辛(Digxigenin , DIG)、罗丹明 （Rhodamine ）、 荧光素 （Fluorescence ）、PI 、DAPI 探针设计 （TEL） 探针类型： v按核酸性质分类 可分为DNA探针、RNA探针、 cDNA探针、 cRNA探针及 寡核苷酸探针等； v 按探针检测 目的分类 可分为融合、重排、计数(扩增、缺失) ； 融合探针以BCR/ABL1为例： BCR BCR- ABL ABL 正常 融合 重排探针以ALK重排为例： 计数探针以CEP8为例： 目录 CONTENTS FISH检测的基本原理 FISH检测的流程 FISH检测的临床应用 间期FISH 中期FISH 标本前处理 1.骨髓血液常规处理 （1）低渗孵育：低渗液(0.075M KCL) ； （2）固定：固定液(甲醇:冰醋酸 3:1)； （3）滴片：混匀，保证粘连的细胞得以分离； （4）老化：56℃烤箱中烘烤2小时； 细胞核分布尽量均匀，分散，杂质较少，每个高倍镜视 野10细胞为最佳效果 标本前处理 2.实体组织标本处理 （1）脱蜡脱水:二甲苯脱蜡2次各10m ins,无水乙醇脱水2 次各5m in； （2）预处理：50m l,1N NaSCN溶液,80℃； （3）消化:50m l,胃蛋白酶溶液,37℃(1N HCL + 20ul 胃 蛋白酶)； 变性杂交 杂交仪预热30m in ；加探针、