临床免疫学—发光免疫分析.ppt

双抗原竞争抗体分析模式 小分子半抗原 技术要点 抗体匹配 受体微球-抗体偶联 生物素标记抗体 优化检测体系 技术评价 均相：无需洗涤分离、固相吸附，操作简单速度快，适合小分子半抗原 受体微球和供体微球性质稳定：生物活性不受损 三级放大系统：较高分析灵敏度 液相立体的抗原-抗体反应环节 较低背景信号，具较高的分析敏感度 基质效应影响 第七节 化学发光免疫技术的应用 检测项目 甲状腺激素: T3、T4、 FT3、FT4、TSH、TGAb、 TPOAb 生殖激素：β-HCG、FE3、AFP、 PRL、FSH、LH、 PGN、E2、TES 肾上腺和垂体激素：ALD、COR、GH、PTH、ACTH 贫血因子：VitB12、FOLATE、FER 肿瘤标志物：AFP、CEA、PSA、fPSA、CA19-9、 CA12-5、CA15-3、 CA72-4 第七节 化学发光免疫技术的应用 检测项目 感染性疾病：衣原体、弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒 病毒标志物：HBV、HIV、HCV等 糖尿病：INS、C-P 心血管系统：CK、CK-MB、MB、CTNI、BNP、MYO 骨代谢：骨胶原酶、脱氧吡啶啉 过敏性疾病：IgE 治疗药物:茶碱、地高辛、环孢素、巴比妥、苯妥英钠、 丙戊酸、卡马西平 小 结 学习目标 掌握 主要类型、分析原理、性能特点和临床应用 熟悉 主要发光剂及其发光原理 以纳米微球为固相材料的性能特点 了解 非均相发光免疫分析的洗涤分离方式 均相发光免疫分析的性能特点 发光免疫分析的分类 名称 标记物 发光类型 特点 均相 非均相 时间分辨 镧系元素 荧光 长寿命荧光 均相或非均相 荧光偏振 FITC 荧光 偏振荧光 均相 酶促发光 ALP、HRP 酶促化学发光 需发光底物 非均相 化学发光 吖啶酯 直接化学发光 碱性环境、H2O2 非均相 电化学发光 三联吡啶钌 电激发发光 需电子供体-三丙胺 非均相 活性氧途径均相 酞氰、二甲基噻吩衍生物、铕螯合物 荧光 标记物与微球偶联而不与抗原或抗体偶联 均相 原理 直接发光法 酶促发光法 电化学发光 标记物 发光底物 (或发光条件) 固相载体 吖啶酯 碱性环境 (H2O2和NaOH) 磁性微粒 ALP 4-MUP 金刚烷 微粒子 聚苯乙烯珠子 HRP 鲁米诺 磁性微粒 三联吡啶钌 三丙胺 磁性微粒 技术要点 抗原抗体反应 双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 标记免疫复合物(B)和游离标记物(F)分离/不分离 光强度的检测 标准曲线制作和标本结果计算 500nm,Fe2O3 * 吉卜力 高田勋 成虫利用物种特有的闪光信号来定位并吸引异性，借此完成求偶交配及繁殖的使命，少数萤火虫成虫利用闪光信号进行捕食，还有一种作用是作为警戒信号，即当萤火虫受到刺激时会发出亮光。[ * 发光器由发光细胞、反射器和晶体组成，都有神经相连，眼柄上的结构不同。磷虾发射蓝色冷光。一些研究员认为磷虾可能是用荧光来作伪装的用途，用光线来令它们的影子变得明亮如周围的环境，令位处其下方的捕猎者更难注意得到它们。 * * * * * * 直径500nm，Fe2O3 * * 与过氧化氢反应能自发光，但强度较弱，持续时间较短，本底高，少用。 * 直径500nm，Fe2O3 * * * 测量池是电化学发光过程中所有电化学发光反应进行的场所。反应液由蠕动泵运送入测量池，反应后由测量池流出。一个激发电极在测量池的下方，两个测定电极安装在激发电极上方的两侧，留出一个清晰的窗口以便使发射的光子被光电倍增管收集。在测量池下装置可移动的用以吸引磁性微粒的磁铁。 酶促反应的发光剂 经酶的降解作用而发出光的一类发光剂。 HRP的发光剂 鲁米诺或其衍生物 对-羟基苯乙酸 ALP的发光底物 AMPPD 4-MUP HRP的发光剂 1、鲁米诺(luminol)或其衍生物 pH8.6 425nm HRP的发光剂 2、对-羟基苯乙酸(HPA) HPA+ H2O2 氧化二聚体（荧光物质） 450 nm波长荧光 HRP 350nm激发 ALP的发光剂 1、AMPPD（金刚烷）470nm 稳定 不稳定 ALP的发光剂 2、4-MUP 4-MUP ALP 4-MU