临床免疫学—电解质及钙的测定2015检本.ppt

体液平衡测定 实验目的 掌握离子选择电极法（ISE）测定血清钠、氯、钙离子的原理和临床意义；邻甲酚酞络合铜法测定血清总钙的原理。 熟悉电解质分析仪的使用方法和日常维护；邻甲酚酞络合铜法的操作方法和注意事项。 了解电解质分析仪的基本结构；邻甲酚酞络合铜法的方法学评价。 实验安排 离子分析仪检测K、Na、Cl、和iCa 半自动仪器测定总钙（OCPC法） 一、电解质的测定 K、Na、Cl、Ca的测定——（离子选择电极）ISE 1. 测定原理 以钙离子为例，钙离子选择电极膜与钙离子结合，如果钙离子膜内外两面分布不均，将产生一个跨膜电位，因为电极内溶液离子钙浓度是恒定的，所以膜电位的变化 ，在一定条件下，与溶液中的钙离子浓度的对数成正比。 （ ISE电位和溶液中离子浓度的关系符合Nernst方程式） 离子选择性电极法（膜电极法） 电动势 特点：仅对溶液中特定离子有选择性响应 ISE与参比电极共同浸入样品试液中构成一个原电池，通过测量原电池的电动势E，便可求得被测离子的活度或浓度。 外参比 内参比 2. 方法评价 操作简便、快速、重复性好 准确度和敏感性高，影响因素少 注意事项 采集后应尽快检测。 标本最好用血清。 避免溶血。 血清总钙的测定 邻甲酚酞络合酮法 血清总钙测定的原理 在pH 11的碱性溶液中，邻-甲酚酞络合酮(OCPC)与钙络合生成紫红色螯合物，此紫红色螯合物在575nm波长处有吸收峰，与同样处理的钙标准液比较，利用比尔定律进行计算，以求得血清总钙的含量。 实验用试剂及操作 R1：乙醇胺缓冲液 R2：8-羟基喹啉 ？ 邻-甲酚酞络合酮（OCPC） R1：R2＝1：1混合成应用液R 血清钙标准液（2.50mmol/L） S：R=1: 50，37。C 5min，波长=575nm 半自动仪器的吸样量：500ul 参考区间：2.03-2.54mmol/L 注意事项 外源性Ca2+污染。 标本最好用血清或肝素抗凝的血浆。 镁对钙测定的干扰。 评价 钙浓度在1.25～5.0mmol/L内，浓度与吸光度呈线性关系，且本法在显色后30min内吸光度无波动，显色稳定。 本法试剂单一，操作简便，既适用于手工操作，也适用于各种自动分析仪，灵敏度，准确度和精密度均较高，是目前国际推荐的测定血钙的常规方法。 血清钙测定最常见的干扰因素是血红蛋白，胆红素，脂质和镁。血红蛋白2g/L，胆红素342μmol/L，甘油三酯4.3mmol/L和镁2.06mmol/L时对本法测定结果无明显干扰。 思考题 1、为什么要用去离子水或重蒸馏水配制试剂？2、代谢性酸中毒为什么会出现血清钙离子浓度增高？ 实验预告 如何从小白兔的耳静脉顺利取血？