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探究性实验一 微生物的培养与应用 课题1、　微生物实验室培养 1．培养基概念、培养基的分类、特点和用途 2. 培养基的配制原则和营养构成 3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 5．对位训练 课题1、　微生物实验室培养 1．培养基概念： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 划分 标准 培养基种类 特点 用途 物理 性质 化学 成分 用 途 工业生产 观察微生物的运动、分类、鉴定 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 分类、鉴定 工业生产 鉴别不同种类的微生物，如可用伊红— 美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否 有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带 有金属光泽) 不加凝固剂 加凝固剂，如琼脂 含化学成分不明 确的天然物质 培养基成分明确 液体培养基 半固体培养基 半固体培养基 天然培养基 合成培养基 选择培养基 鉴别培养基 根据微生物的代谢特 点，在培养基中加某 种指示剂或化学药品 培养基中加入某种化 学物质，以抑制不需 要的微生物的生长， 促进所需要的的生长 培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐) 目的要明确：根据微生物的种类、培养目的选择不同的原料配制 培养基 营养要协调：配制培养基时要注意各营养物质的浓度和比例、PH 要适宜 2.培养基的配制原则和营养构成 (1)培养基的配制原则 (2)培养基的营养构成 ①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源 和无机盐。 ②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 ? 3．配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项 (1)步骤： (2)注意事项 计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板 ①倒平板的温度一般在50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 ②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 ? 4．纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项 (1)原理： (2)方法： 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 平板划线法、稀释涂布平板法 平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图) 平板划线法： 　①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。 ②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 ③划线时最后一区域不要与第一区域相连。 ④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 注意: 稀释涂布平板法： Ⅰ.系列稀释操作(图1)： a．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101～106的顺序编号。 b．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3次，使菌液与水充分混匀。 ? c．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复b步混匀操作。 以此类推，直到完成最后1支试管的稀释。 Ⅱ.涂布平板操作如图2所示： 稀释涂布平板操作复杂，各个细节均应保证“无菌”。具体如下： ①酒精灯与培养皿的距离要合适； ②吸管头不要接触任何其他物体； ③吸管要在酒精灯火焰周围使用。 注意： 对位训练 1．有关稀释涂布平板法的叙述中，错误的是(　　) A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C．适宜条件下培养 D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落 2．分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请完成下列问题。 (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。 (2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？_______________________________。 D 答案　(1)葡萄糖　尿素　(2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长 课题2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．筛选菌株的原理 2．统计菌落数目的方法 3．细菌分离与计数的实验流程 4．该实验中的注意事项 5．对位训练 课题2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数