四环素类抗生素29347.pptVIP

四环素类抗生素的鉴别试验 1 浓硫酸反应 四环素类抗生素遇硫酸立即产生颜色，不同的四环素类抗生素具有不同的颜色。根据不同的颜色变化可以区别各种四环素类抗生素。 盐酸四环素呈深紫色 盐酸金霉素呈蓝色，渐变为橄榄绿色，加水后呈金黄色或棕黄色 盐酸土霉素呈朱红色，加水后变为黄色 盐酸多西环素呈黄色 盐酸美他环素呈橙红色 2 三氯化铁反应 本类抗生素分子结构中具有酚羟基，遇三氯化铁试液即呈色。 盐酸四环素：红棕色 盐酸金霉素：深褐色 盐酸土霉素：橙褐色 盐酸多西环素：褐色 3 薄层色谱法 设备简单，操作容易，分离效果亦佳，中国药典、都采用本法鉴别四环素类抗生素 本类抗生素及其降解产物在紫外光（365nm）下产生荧光，可用于检出斑点并以对照品进行鉴别。 4 高效液相色谱法 中国药典和USP（25）采用高效液相色谱法鉴别盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸多西环素、盐酸金霉素。 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。 不良反应 胃肠道反应 刺激所致。恶心、呕吐、腹部不适 等。饭后服减轻（但减少吸收） 二重感染 敏感菌株受抑，不敏感菌株大量繁殖。 对骨、牙生长的影响 沉积于骨、牙，与Ca 2+结合 变黄 发育不全 畸形、龋齿 发育障碍 禁用于 妊娠４月以上的妇女 8岁以内的儿童 肝、肾毒性 为长期口服或大剂量静脉给药所致，可致肝脂肪性坏死，加重肾功能不全，易发生于孕妇 过敏反应 药热、皮疹、光敏性皮炎等，偶可致剥脱性 皮炎 6. 维生素缺乏 制造维生素B、K细菌受抑，致口角炎、舌炎、出血 第二节 四环素的发酵工艺 一 生产菌种 1 金霉素生产菌种－金色链霉菌（S.aureofa-ciens）,通过在培养基中加入抑氯剂和氯的竞争剂时，则能合成95％的四环素。 2 诺卡菌属（Nocardia）、马杜拉放线菌属（Actinomadura）等也能产生四环类抗生素 四环素生产采用合成金霉素的金色链霉菌菌种，通过在特定的培养条件下，控制产生菌的生物合成方向，使其产生95%以上的四环素。 3 诱变育种采用的方法 紫外线，氮芥、乙烯亚胺，放线素K等 1959年，刘颐屏利用基因重组技术并结合诱变因素处理，获得的金霉菌“重组2U-84”，发酵水平比出发菌株Uk-81提高40％。 同时还发现重组体菌株对诱变因素的敏感性增加，这样更有利于获得高产变种的机会。 4 金霉菌的培养特征 金霉菌在马铃薯、葡萄糖等固体斜面培养基中生长时，营养菌丝能分泌黄金黄色色素，但其气生菌丝却没有颜色。孢子在初形成时是白色的，在28℃培养5-7d，孢子从棕灰色转变为灰黑色。 5 金霉菌形态 孢子形状一般呈圆形或椭圆形，也有方形或长方形，孢子在气生菌丝上排列成链状 6 金色链霉菌沉没培养的生长时期 A 第一期（原生菌丝期）孢子吸水膨胀，发芽，长出分枝，分枝旺盛而生长成一个菌丝团 B 第二期（次生菌丝期）菌丝团散开，主体菌丝两侧的次生菌丝延长、交织成网状，菌丝分枝明显 C 第三期（分泌期）菌丝趋短或中长状，菌丝侧枝中有中短分枝，菌丝中出现空胞，中后期菌丝更短，分枝减少，成短枝芽状。 D 第四期（自溶期）菌丝形态趋模糊，最终自溶。 二 种子制备及控制 1 孢子制备 砂土管 母斜面 子斜面 种子罐 发酵罐 影响因子：水、麸皮 2 种子培养 培养基：蛋白胨、花生饼粉、淀粉 培养条件：30～32℃，24～27h 标志：菌丝形态处于第二期末或第三期初；菌体处于代谢旺盛阶段，C、N源明显被利用；pH值下降后又上升，达到pH＝6.0左右；培养液因菌丝增加而粘稠，色泽逐渐带黄色，有少量四环素出现 影响因子：通气、搅拌 三 发酵控制 四环素生产一般采用二级或三级发酵方式 1 培养基： N源：花生饼粉，黄豆饼粉，棉籽饼粉，硫酸铵，氯化铵，硝酸铵，尿素等 （玉米浆） C源：淀粉，可溶性淀粉，葡萄糖，糖蜜，油脂等 无机盐：磷酸盐 无机磷浓度是控制菌丝生长率的重要因子，也是金色链霉菌从生长期转入抗生素合成期的关键因素。（表6-7） 高浓度的磷酸盐能抑制产生菌体的戊糖循环途径中的6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性，同时促进糖酵解速度，使菌体内能产生NADPH的戊糖循环途径受阻。还原性辅酶Ⅱ是四环素生物合成中的氢供体，另外磷酸盐对合成四环素前体丙二酰CoA的合成有较强的抑制作用，所以生产中要控制发酵培养液中的磷酸盐含量，保证通气效果，提高发酵水平。 抑氯剂：抑氯剂对改变金霉素合成方向均有