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选修 3 《现代生物科技专题》知识点总结 第一步:目的基因的获取
专题 1 基因工程 1. 从基因文库中获取(不知道目的基因的核苷酸序列的情况下采用)
2. 人工合成 。
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外 DNA重组和转基因技术,赋予 常用方法有:( 1)反转录法(已经获得 mRNA的情况下采用)
生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA (2)化学合成法(知道目的基因的核苷酸序列、基因比较小的情况下采用)
3.PCR技术扩增目的基因(知道目的基因两端的核苷酸序列、基因比较大的情况下采用)
分子水平上进行设计和施工的,又叫做 DNA重组技术。
(1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术。
操作水平: DNA分子水平
(2)目的:获取大量的目的基因
原理:基因重组
(3)原理: DNA双链复制
优点: 1. 突破物种界限 2. 定向改造生物的遗传特性
(4)过程:第一步:变性,加热至 90~95℃DNA解链为单链;(高温解旋)
(一)基因工程的基本工具
第二步:复性,冷却到 55~60℃,引物与两条单链 DNA结合;
1. “分子手术刀”——限制性核酸内切酶( 限制酶 )
(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。 第三步: 延伸,加热至 70~75℃,热稳定 DNA聚合酶 从引物起始进行互补链的合成。
n
(2)功能:能够 识别特定的核苷酸序列 ,并在特定的切点切割,因此具有专一性。 (5)特点:指数 (2 ) 形式扩增
(3)作用的化学键:切割 磷酸二酯键 第二步:基因表达载体的构建 ( 核心 )
(4) 结果:经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。 1. 目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和
发挥作用。
2. “分子缝合针”—— DNA连接酶
2. 组成: 目的基因 +启动子 +终止子 +标记基因
(1) 作用:将两个具有相同粘性末端的 DNA片段连接起来,形成重组 DNA
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