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高 中 生 物 选 修 3 知 识 点 总 结 班级： _____________ 姓名： _____________ 1 专题 1 基因工程 基因工程的概念 ： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过 体外 DNA 重组和转基因 技术，赋予生物以 新的遗传特性 ，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物 产品。基因工程是在 DNA 分子水平 上进行设计和施工的，又叫做 DNA 重组技术 。 基因工程的原理： 基因重组 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（ 限制酶 ） 1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 2）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种 特定的核苷酸序列 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有专一性。 3）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”—— DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶（ E· coliDNA 连接酶和 T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合 磷酸二酯键 。 ②区别： E·coliDNA 连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链 DNA 片段互补的黏性 末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA连接酶能缝合两种末端，但 连接平末端的之间的效率较低。 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同 : DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA 连接酶是连接两个 DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 DNA连接酶 DNA 聚合酶 不同点 连接的 DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2 个 DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链 DNA 片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 3.“分子运输车”——载体 1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。 ③具有 标记基因 ，供重组 DNA 的鉴定和选择。 2）最常用的载体是质粒 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。 3）其它载体： λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2.原核基因采取 直接分离 获得，真核基因是 人工合成 。人工合成目的基因的常用 方法有反转录法 _和化学合成法 _。 3.PCR技术扩增目的基因 2 1） PCR的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。 2）目的：获取大量的目的基因 3）原理： DNA 双链复制 4）过程：第一步：加热至 90～ 95℃DNA 解链为单链； 第二步：冷却到 55～ 60℃，引物与两条单链 DNA 结合； 第三步：加热至 70～75℃， 热稳定 DNA 聚合酶 从引物起始进行互补链的合成。 5）特点：指数 (2n )形式扩增 第二步：基因表达载体的构建 (核心 ) 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 1）启动子：是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基因的首端，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA，最终获得所需的蛋白质。 2）终止子：也是一段有特殊结构的 DNA 片段 ，位于基因的尾端。 3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞 _ 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达 的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法 ，其次还有 基因枪 法和 花粉管通道法 等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术 。方法的受体细胞多 是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先 2+ 用 Ca 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体 DNA 分子 溶于缓 冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA 分子，完成转化过程。 3.重组细胞导入受体细胞后， 筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 1.首先要检测转基因生物的染色体 DNA 上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA 分子杂交 (DNA-DNA)技术 。 2.其次还要检测目的基因是否