目的基因筛选与dna文库构建.pptxVIP

第六章 目的基因筛选与DNA文库的构建 ;; 基因文库（Gene library）： 由大量的含有基因组DNA（即某一生物的全部DNA序列）的不同DNA片段的克隆所构成的群体, 称之为基因文库。 一个完全的基因文库，应该能够保证从中筛选到目的基因。 即 Genomic library;? 基因组 DNA 文库： 指将某生物体的全部基因组 DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的 DNA 片段，与合适的载体体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。 ;cDNA文库: complementary DNA 互补DNA 由某一生物的特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经反转录形成的cDNA，它们所构成的重组DNA克隆群体，则称之为cDNA基因文库。;基因组 DNA 文库的构建程序： 1、载体的制备； 2、高纯度大分子量基因组 DNA （High molecular weight DNA, HMW DNA）的提取； 3、HMW DNA 的部分酶切与脉冲电泳分级分离（PFGE size selection）； 4、载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； 5、重组克隆的挑取和保存。 构建噬菌体文库，连接产物不用电转化的方法转化宿主，而是采用包装蛋白进