壳寡糖类混合型饲料添加剂中壳寡糖含量的测定方法.pdfVIP

T/CAI 002—2019 附录A （规范性附录） 壳寡糖类混合型饲料添加剂中壳寡糖含量的测定方法 A.1 原理 壳寡糖经浓盐酸水解生成氨基葡萄糖盐酸盐，根据氨基葡萄糖盐酸盐在流动相和固定相 之间具有不同的分配系数，将水解后的试样注入液相色谱，经氨基柱进行色谱分离、蒸发光 散射检测器检测，以保留时间定性、外标法定量测定。 A.2 测定方法 A.2.1 仪器和设备 a) 高效液相色谱仪：带蒸发光散射检测器； b) 分析天平：精度0.1 mg ； c) 旋转蒸发仪。 A.2.2 试剂和溶液 a) 氨基葡萄糖盐酸盐(≥98%)； b) 浓盐酸：分析纯； c) 乙腈：色谱纯。 A.2.3 参考色谱条件 a) 色谱柱：氨基柱(4.6 mm×250 mm)或其他同等分析效果的色谱柱； b) 流动相：乙腈：水=80 ：20 （体积比）； c) 流速：1.0 mL/min； d) 柱温：30ºC ； e) 蒸发光检测器：蒸发温度60ºC，雾化温度30ºC ； f) 进样量：20 µL 。 注：待仪器基线平稳后再进样。 A.3 分析步骤 a) 试样的制备 准确称取壳寡糖类混合型饲料添加剂试样200 mg （精确到0.1 mg ）至水解管中，加入 2 mL 蒸馏水涡旋混匀，加入12 mL 浓盐酸，于100ºC±5ºC 条件下水解3 h ~4 h，冷却。用旋 转蒸发仪蒸发除酸，然后转移至50 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀得到供试品溶液。 将供试品溶液通过水系滤膜（0.22 μm ）过滤，弃初滤液约0.5mL，取滤液，进样。 8 T/CAI 002—2019 注：若测定结果与产品实际标注差异显著，可根据情况适当延长水解时间，以确保样品全部水解。 b) 标准曲线的绘制 称取180 mg 麦芽糊精于水解管中，另准确称取氨基葡萄糖盐酸盐用水配制成10 mg/mL 的溶液，准确移取2 mL 于水解管中，按试样项方法处理，用水定容到刻度20 mL ，得到氨基葡萄糖盐酸盐标准储备液（1 mg/mL）。分别配制0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、 0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL 系列标准溶液。在参考色谱条件下进样，以色谱峰面 积为纵坐标，标准物质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 注：若样品测定超出标准曲线范围，需将供试品溶液稀释适当倍数后进行测定。 c) 试样含量测定 在相同色谱条件下，将处理后的试样溶液注入色谱仪中，记录色谱峰的保留时间和峰 面积。用氨基葡萄糖盐酸盐的峰面积来定量，根据标准曲线得到待测液中氨基葡萄糖盐酸 盐的浓度。 A.4 结果计算 壳寡糖含量（以质量分数计)按公式计算： c×50 w 2 × 100% m × −w (1 1) 式中： c —— 由标准曲线查得的氨基葡萄糖盐酸盐的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL) ； 50——样品体积，单位为毫升（mL ）； ——称取待测壳寡糖粉末试样的质量，单位为毫克(mg)； R 1 ——待测壳寡糖样品的含水量，单位为质量百分数（% ）； R2——壳寡糖粉末的含量，以氨基葡萄糖盐酸盐计，以干基计，单位为质量百分数（% ）； 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留二位有 效数字。 A.5 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5% 。