硝酸还原酶测定方法.docxVIP

硝酸还原酶活力的测定 1 原理 硝酸还原酶（ nitrate reductase,NR ），是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的 硝酸盐还原为亚硝酸盐（NO  3  ˉ+NADH+H ＋ → NO  2  ˉ+NAD＋+H  2  O ）。产生的亚硝酸盐与 对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及 α- 萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定 量生成红色偶氮化合物。其反应如下： 生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性 可由产生的亚硝态氮的量表示。一般单位鲜重以 ug/(g·h) 为单位。NR 的测定可分为活 体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。 药品配制 1) 0.1mol/L pH 为 7.5 的磷酸缓冲液: 2.4965g, 溶解并定容至 1000ml.  称取 Na2HPO4·12H2O 30.0905g, NaH2 PO4·2H2O 2) 0.2 mol/L KNO3 溶液: 2.5275g KNO3 用 pH 为 7.5 的磷酸缓冲液溶解并定容至 100 ml. 3) 30%三氯乙酸：75.0g 三氯乙酸用水定容至 250mL。 4)  硝酸试剂的配制: 0.5g α-萘胺加水煮沸 1-2 分钟,趁热加入 1.25g 对氨基苯磺酸, 再加 250 ml 冰醋酸,加水定