茶多酚酒石酸亚铁比色法.docxVIP

多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理紫褐色络合物，溶液颜 多酚类物质的提取与含量测定 一、实验原理 紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所用的标准物则 需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表 茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。 二、实验材料、试剂与仪器 材料：茶叶； 仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等； 三、操作步骤 （一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用 （二）样品总多酚的提取 （二）样品多酚提取液的多酚总量测定 四、计算 相应公式，求得样品中茶多酚的含量。 酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的 试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取 1.00g 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和 5.00g 酒石酸钾钠 (C4H4O6NaK·4H2O）, 混合后加蒸馏水溶解,定容到 1000mL； （2）pH 7.5 磷酸盐缓冲液：称取 60.20g Na2HPO4·12H2O 和 5.00g NaH2PO4·12H2O， 混合后加蒸馏水溶解,定容到 1000mL。 # 标准曲线的制作参照 GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。 为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为 1.00 时，供试液中茶多酚的浓度为 7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。 准确称取 1.0g 磨碎并混匀的茶叶样品于 200mL 三角瓶中，加入 80mL 沸水，并在沸水浴 中保温浸提 30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至 100mL。 吸取 1mL 样品多酚提取液于 25mL 容量瓶中，加入 4mL 蒸馏水和 5mL 酒石酸亚铁溶液， 摇匀，再用 pH 7.5 磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提取液，加入 与样品测定同样的试剂作空白，用 0.5cm 比色皿在 540nm 波长处测定吸光度。 4.3 测定步骤 4.3.1 试液的 制 备 按 GB 8305-87《茶 水浸出物测定》中 3.4.1 的规定,制备试液。 4.3.2 测定 准确吸取上述(4.3.1)试液 1mL,注入 25mL 的容量瓶中,加水 4mL 和酒石酸亚铁 溶液 (3.1)5mL,充分混合,再加 pH7.5 的缓冲液(3.2)至刻度,用 10mm 比色杯,在波长 540nm 处,以试剂空白溶液作参比,测定吸光度(A)。 7.826 —吸光度为 1.00 时,茶多酚含量的经验值 (mg/mL)。 # 如果制作标准曲线，则样品提取液的测定与标准曲线制作步骤相同，并根据标准曲线和 计算方法和公式 茶 叶中茶多酚的含量,以干态质量百分率表示,按下式计算: A×1.957×2 L1 茶多酚(％)＝——————×—————×100 100 L2×M×m 式中: L1--试液的总量,mL; L2--测定时的用液量,mL; M--试样的质量,g; m--试样干物质含量 百分率,％； A--试样的吸光度; 1.957--用 10mm 比色杯,当吸光度等于 0.50 时,每毫升茶汤 中含茶多酚相当于 1.957mg。如果符合重复性(5.2)的要求,则取两次测定的算术平均值作 为结果。 5.2 重复性 同一样品的两次 测 定值之差,每 100g 试样不得超过 0.5g。