发酵过程参数相关分析基本原理和应用.ppt

各种参数传感器技术 发酵尾气分析过程质谱仪 建立新型跨尺度参数在线检测、研究方法 在位细胞形态显微观察仪 生物过程工程实验室 建立新型跨尺度参数在线检测、研究方法 工业生物过程远程诊断研究室 建立生物过程在线数据处理网络系统与数据库 实验室网络拓扑图（为异地远程诊断提供技术平台）和数据中心实景图 菌种筛选与基因工程改造 常规育种技术 基因工程改造 代谢产物的多基因合成 次级代谢全局基因调控 转录、表达、代谢----系统生物学 vgb基因应用 辅因子代谢工程 用于高通量筛选的装置技术应用与研制 pH测量与计算机补料控制摇床 微型化生物反应器应用与研制 探索工业生产过程的代谢流分析与过程优化、基因工程改造 如何采用瞬时同位素测定代谢流等代谢流分析方法，深入研究高产菌株生长特性与代谢规律，寻找抗生素 生物合成的关键限制性步骤，进而针对限制性步骤进行基因操作，尝试进一步提高产素水平。 以13Ｃ等稳定性同位素测定的微观代谢流分析与过程优化、菌种改造相结合。 Parallel metabolic pathways Metabolic cycles (futile cycle) Bidirectional reaction step Energy metabolites Why the Isotopomer Labeling Approach? When does Stoichiometric MFA fail? Revisiting the 13C-label distribution of the non-oxidative branch of the pentose phosphate pathway based upon kinetic and genetic evidence Roelco J. Kleijn,2005 Method and principle CLE (carbon-labeling experiment ) 谢 谢！ Thanks! * * 第一部分有关项目背景：红霉素及其衍生物市场需求大，2006年销售额达35亿美元，位居抗生素销售额第三位；而阻碍我国此类产品进入国际市场竞争的瓶颈问题在于有效组分问题和高效节能的绿色规模化生产 * * 要解决上述瓶颈的关键技术和难点在于：工业用生产菌种的基因改造难度大、发酵过程的优化与放大均需要创新的理论与方法、分离纯化过程中需要节能减排先进分离技术 * * 1.首次成功应用代谢工程改造技术对红霉素工业生产菌种进行改造，提高了发酵业中的有效组分，在此工作中，首先克服了工业生产用红霉糖多孢菌的遗传操作的障碍，成功实现了对工业菌种的基因工程改造 * * 其中非常重要的一项工作就是通过对红霉素生物合成中修饰途径关键基因的改造，通过强化、调节和协调，实现了工业生产菌中有效组分A的含量的提升，而副产物B，C组分大大下降的结果。实验过程中共获得9个有效突变株，两个菌株的生物效价也提高近30％，B，C组分无积累 * * 如图中所示，与对照的出发菌株相比，出发菌株中前后两个B,C组分的峰，在突变菌中基本检测不到。目前正在50L发酵罐上对这两个菌株进行验证验证。 * * 2.红霉素发酵工艺优化，利用多尺度发酵过程理论与方法对红霉素发酵进行优化研究。项目组在长期的研究中，认识到发酵过程作为细胞生命代谢复杂系统存在着基因尺度、细胞尺度和反应器尺度的多尺度相关关系，发酵过程中任何一个尺度的问题没有把握好，都有可能导致发酵过程的失败。要实现发酵过程的优化，必须能实现跨尺度的观察与调控。 * * 项目研究首先是在50L发酵罐上进行，然后在工业规模120吨发酵罐上进行放大。在此过程中项目组在50L和工业规模发酵罐上同步安装了可实时采集发酵过程表征细胞代谢特性的高级软件包，在这软件包上除了可获得实施代谢特征参数变化趋势，如表征细胞代谢强度的摄氧率（OUR）等，此外还可对细胞的菌丝形态实时的离线输入，最终实现发酵过程的跨尺度测量和调控。 * * 在发酵过程的优化与放大研究中，我们注重以宏观代谢流分析与控制为核心的发酵过程动态优化研究，具体地通过培养基的优化、廉价原材料的替代；产物合成代谢流强化策略；其他发酵过程操作因子的优化等实现了发酵过程的动态优化。 * * 在生产罐发酵过程优化与调整中，我们开展了氮源调整试验、补糖时机选择、转速与流量控制、补料工艺、取消带放补水工艺邓研究，其中原带放补水工艺与优化工艺代谢曲线 变化情况如图；同时我们也获得了生产罐典型发酵代谢趋势曲线 ，为优化提供了依据。 * * 3、基于反应器流场特性和细胞生理代谢特性相结合的发酵过程放大技术研究。由于工厂生产规模的需求，企业拟利用370吨的发酵罐用于扩产红霉素。370吨的