纸层析法分离鉴定氨基酸.pptxVIP

实验二、纸层析法分离鉴定氨基酸;将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。 所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图;;三、操作; ;4、展层：将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒状，用透明胶纸粘接或用线缝好，纸的两边不能接触。将滤纸直立于层析缸中（注意：点样的一端在下，展层剂的液面需低于点样线1cm ，滤纸勿与缸壁接触），盖好层析缸盖，进行展层。待溶剂上升15～20 cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，电吹风吹干。; ;四、计算： 用直尺测量并计算出各种氨基酸的Rf值。 ;试剂和器材： 1. 试剂： (1) 氨基酸溶液：0.5% (m/V)的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液 (各组分的浓度均为0.5％)。 (2) 展层剂：正丁醇∶冰醋酸∶水＝4∶1∶3 (V/V)。 (3) 显色剂：0.1％ (m/V)水合茚三酮正丁醇溶液 。 2. 器材： 层析缸；层析滤纸（新华一号）；毛细管;喷雾器；电吹风；直尺；铅笔；针线或透明胶带 ；一次性手套 。