植物药用成分的提取和生产工艺.pptVIP

2. 激素类 有胰岛素、生长激素、心钠素、人促肾上腺皮质激素等。 3. 治疗心血管及血液疾病的活性蛋白类 （1）溶解血栓类，如：人组织纤溶酶原激活剂（tPA） （2）凝血因子类，如：凝血因子Ⅶ、凝血因子Ⅷ等。 （3）生长因子类，如：促红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）等。 （4）血液制品，如：血红蛋白、白蛋白等。 5. 可溶性细胞因子受体类，如：IL-1受体、TNF受体等。 6.导向毒素类 （1）细胞因子导向毒素，如：IL-1导向毒素、EGF导向毒素 （2）单克隆抗体导向毒素，如：抗-B4-封闭的蓖麻毒蛋白 7. 基因工程疫苗 （1）基因工程亚单位疫苗，如：乙肝疫苗 （2）基因工程载体疫苗，如：麻疹疫苗 （3）核酸疫苗，如：流感疫苗、单纯疱疹病毒疫苗 第二节 几种重要的生物技术药物简介 一、人生长激素 是脑垂体前叶分泌的一种蛋白质类激素，能促进人和动物的生长，临床上用来治疗多种疾病。 （一）分子结构和性质 由191个氨基酸组成的非糖基化蛋白质，分子质量21.5kD，N端和C末端均为苯丙氨酸。等电点为5.2。用糜蛋白酶或胰蛋白酶部分水解hGH，其活性并不丧失，说明hGH活性不需要整个分子。 H2N COOH 1 191 人生长激素的一级结构 53 165 182 189 phe （二）生产工艺 1. 合成hGH基因 用化学合成法合成hGH191肽编码序列，将合成的基因片段用分子克隆技术分别进行克隆化、扩增和纯化，并连接形成完整的hGH基因。通过定点突变对hGH基因进行改造。 2.构建表达载体 pIN-Ⅲ-ompA3质粒含Ipp启动子和外膜蛋白ompA的信号肽（α1肽）编码顺序，将经过改造的hGH基因克隆到ompA信号肽编码序列之后的EcoRⅠ位点和黏性末端用DNA聚合酶的修平的HindⅢ位点之间，得到表达质粒pSS-M。 3. 细菌转化和表达hGH 用pSS-M质粒转化大肠杆菌K802，获得基因工程菌株，能高效表达含信号肽的hGH前体蛋白。前体蛋白分泌到细胞内膜时，信号肽被切除，同时形成2个二硫键，成熟hGH分泌到细胞周质内。 4. 粗提取 通过渗透休克处理，从周质提取hGH粗品，纯度约30%。 5. 纯化 通过等电点（pI=5.2）沉淀，硫酸铵盐析， Q-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱色谱和Sephacryl S-200 柱凝胶过滤得hGH纯品，纯度达95%以上。 （三）检测方法 1.质量检测 重组hGH为澄清透明液体，SDS测定分子量21.5KD，反向HPLC分析肽图与标准品一致；等电聚焦电泳测定pI=5.2；N端氨基酸序列分析结果与文献一致；点杂交法测定残余DNA量100pg；HPLC测定纯度为95%。 2.活性测定 用大白鼠胫骨增宽法测定生物活性为2.0 IU/mg蛋白。 3. 生物活性 （1）促生长作用 GH能直接或间接地刺激合成代谢过程，如细胞分裂、骨骼生长和蛋白质合成，因此能促进骨骼肌肉、结缔组织、内脏、皮肤、毛发和全身生长。 （2）脂解活性 GH能增强脂肪的氧化作用。 （3）催乳素活性 GH与催乳素的氨基酸序列约有50%的同源性，因此有弱的催乳素活性。 （4）升血糖活性 GH能抑制葡萄糖向全身转移。 （五）临床应用 重组hGH主要用于治疗儿童（15岁以下）自发性垂体性侏儒症。 还可以用于治疗烧伤、创伤、骨折、出血性溃疡、组织坏死、肌肉萎缩症、骨质疏松和肥胖症等； 对毛发生长和乳汁分泌有良好效果； 对免疫系统也有一定的增强作用。 * * 凡能攻积、逐水，引起腹泻，或润肠通便的药物，称为泻下药。 泻下药用于里实的症候，其主要功用，大致可分为三点：一为通利大便，以排除肠道内的宿食积滞或燥屎；一为清热泻火，使实热壅滞通过泻下而解除；一为逐水退肿，使水邪从大小便排出，以达到驱除停饮、消退水肿的目的。 * * RI：示差折光 ，连续测定流通池中溶液折射率来测试试样各组分的浓度。 * * 乙酰解是以CH3CO+（Ac+）为进攻基团，其开裂苷键的难易有与酸水解相似之处，如五碳糖苷键比六碳糖苷键易开裂。但也有与酸水解不同之处。苷键乙酰解难易与其邻位是否有可乙酰化的羟基有关，如果在苷键的邻位有羟基，可使乙酰解的速度降低。　　乙酰解的试剂：乙酸酐与不同酸的混合液。　　苷键乙酰解在双糖中一般规律为: 1-6键＞1-4键＞1-3键＞1-2键。 　　乙酰解可用于多糖苷的结构研究中，糖与糖连接位置的确定。 * * 苷：也称甙、配糖体。为一类由糖或糖的衍生物通过端基碳原子与非糖化合物脱水缩合连接而成的化合物。按苷的存在状态分类：分为： 1） 原生苷：指原存在于植物体内的苷。 2） 次生苷：指原生苷水解后生成的苷。从原生苷中脱掉一个以上的单糖的苷称次生苷或