植物组织培养和应用及无菌技术.ppt

(2)熏蒸灭菌 用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。 常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5—8ml／m3用量，将甲醛置于广口容器中，加5g/m3高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。 喷雾灭菌（物体表面） 物体表面可用一些药剂涂擦、喷雾灭菌。如桌面、墙面、双手、植物材料表面等，可用70%的酒精反复涂擦灭菌，l%-2%的来苏儿溶液以及0.25%—1%的新洁尔灭也可以。 二、无菌操作要求 三、无菌室空气污染情况的检验 平板检验法 用常规培养基，倒成平板，收入接种室。在事先熏蒸好的接种室，使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开，按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入30℃的温箱中培养48小时，检查有无菌殖生长，并由菌落形态，判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟，菌落不超过3个；叙面培养基开塞 30分钟者，以不出现菌落为合格。 四、无菌操作流程 1.实验器具和材料的准备 2.用70%的酒精擦拭超净工作台，开净化工作台和室内紫外灯。 3.关紫外灯、打开风机，过5~10分钟进入缓冲间。 4.用70%的酒精擦拭台面并消毒双手及实验用具。 5.进行外植体的分离、消毒与接种 6.完成工作后清理工作台上的废弃物，用70%的酒精擦拭台面 第五节 植物组织培养环境条件的控制 一、温度 一般为23~27 ℃。喜温性植物如茄科、禾本科、兰科等26~28 ℃，冷凉性植物如百合科、十字花科、菊科等18~22 ℃. 二、光照 1.光照强度 一般为2000~3000lx 2.光质： 一般在419~467nm 3.光周期: 16h的光照，8h的黑暗。 三、湿度 培养器皿内的湿度条件 培养环境的湿度条件50%~80% 四、气体交换 思考题 愈伤组织的形成经过哪几个时期？ 什么是组培苗的玻璃化现象？导致这一现象的因素有哪些？ * 冬枣 6—苄基氨基腺嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、苯基噻二唑基脲(TDZ) * * 美国五针松 * * 极性：植物分化和形态建成中的一个基本现象，通常是指在器官，组织甚至细胞中在不同的轴向上存在某种形态结构和生理变化上的梯度差异 在植物体的发育过程中，由于不同细胞逐渐向不同方向分化，从而形成了具有各种特殊构造和机能的细胞、组织和器官，这个过程成为形态建成(morphogenesis) * * 冰叶日中花 * * 珍珠稷 * * * 植物离体培养的理论，源于19世纪30年代德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann提出的”细胞学说“，其主要观点：细胞是生物体的基本结构单位，由它构成整个生物个体；同时认为植物细胞又是在生理上、发育上具有潜在的全能性功能单位。Schwann还指出：”每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于有机体内一样…….“。 1902年德国著名植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞的观点，这种单个细胞是具有潜在的全能性功能单位。 * * Knotte为Haberlandt的学生 Robbins为美国人 * * White为美国人 * * 到80年代中期，我国用花药培养方法育出80多个水稻新品种和新品系。 在生产上应用最为广泛，最成功的一个领域是植物离体快速繁殖，应用离体培养繁殖的种类日益增多。据粗略的估计有600多种，其中约大部分是园艺植物类。我国目前已有香蕉、柑桔、葡萄、草莓、苹果、凤梨、猕猴桃、罗汉果、枇杷、马铃薯、西瓜、兰花、杜鹃、水仙、月报、百合、康乃馨、菊花、唐昌蒲、小苍兰、金线、莲等数十种园艺植物，建成了离体培养快速繁殖的生产线，生产试管苗投放市场。 许多国家已成立离体培养快速繁殖专业公司，如荷兰是世界花载生产出口国，也是组织培养苗的生产王国，年出田花卉苗4000万株。意大利主要生产桃、柑桔等果树砧木苗，年产量约1000多万株。据保守估计到本世界末组培苗可达6亿株左右，引外，人工种子的研制，在欧洲尤里卡计划中成为生物技术研究的重点项目。德国、法国、瑞士的大公司正在联合研制开发蔬菜人工种子和胚芽生产，并取得阶段性成果。匈牙利研制的马铃薯人工种子，欧共体研制的非洲海枣人工种子，已进行大规模试验。苜蓿、芹菜、番茄、胡萝卜和绿胡椒已实现胚芽生产，现正在扩大到大田作物上的应用研究。 Luis Navarro（1975）用微芽嫁接法脱除柑桔病毒，获得无病毒柑桔苗。 * * * 微体嫁接法（micrografting）是木本植物培养无病毒苗使用的方法。具体做法是将