高等教育动物细胞培养和核移植技术讲课.pptxVIP

（基础）动物细胞培养常用技术手段动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体制备一、动物细胞培养1、概念： 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎原代培养50代细胞2、过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官单个细胞加培养液细胞悬液10代细胞传代培养无限传代动物细胞培养探究1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，分裂能力强2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶没有活性。4.什么叫细胞贴壁？5.什么叫接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 6、如何理解原代培养和传代培养？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？不都能9、有些为何能一直传下去？遗传物质发生改变，朝着癌细胞方向发展探究有关概念细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，称为接触抑制。 原代培养：单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养）将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增殖。传代培养：细胞株：补充细胞系：细胞系细胞株细胞悬浮液50代细胞10代细胞无限传代传代培养原代培养如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？胰蛋白酶除了可消化细胞间的蛋白质外，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。2、过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官剪碎胰蛋白酶处理细胞悬液细胞贴壁、接触抑制原代培养10代细胞细胞株50代细胞传代培养培养液培养细胞系无限传代3、条件：1、无菌、无毒添加一定量的抗生素定期更换培养液培养液和培养器具无菌处理 2、营养（培养基成分）（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清、血浆等。）培养基的不同是动物细胞培养和植物组织培养最重要的区别 3、适宜的温度和PH值36.5 +0.5度 PH为7.2-7.4O2和CO2 4、必要的气体条件CO2的主要作用是维持培养液的PH 4、应用大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）基因工程的受体细胞培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基培养基性质植物激素动物血清培养基特有成分培养结果细胞株、细胞系植株快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物培养目的1.动物细胞核移植的概念、种类：2.体细胞核移植的过程：3.体细胞核移植技术的应用前景：4.体细胞核移植技术存在的问题：二、动物细胞核移植技术和克隆动物胚胎细胞核移植：体细胞核移植：1.动物细胞核移植的概念、种类：概念： 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）细胞分化程度低，恢复全能性容易分类细胞分化程度高，恢复全能性不容易 黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核细胞核移植重组细胞电脉冲刺激早期胚胎胚胎移植妊娠、出生克隆羊多利2.体细胞核移植的过程：例：克隆羊另一头绵羊的子宫核移植技术Ａ母绵羊Ｂ母绵羊卵细胞乳腺细胞细胞质细胞核融合后的卵细胞卵裂早期胚胎C母绵羊子宫分娩妊娠多莉羊多莉羊的培育过程体细胞核移植的过程3.体细胞核移植技术的应用前景：① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育② 保护濒危物种，增加存活数量③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白④ 可以作为异种移植的供体⑤ 可以用于组织器官的移植4.体细胞核移植技术存在的问题：① 成功率低② 克隆动物存在健康问题③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞