促红细胞生成素复习过程.pptVIP

促红细胞生成素 EPO 引言 机体的免疫细胞和非免疫细胞能合成和分泌小分子的多肽因子，它们能调节多种细胞生理功能，称为细胞因子（Cytokines）。 细胞因子 细胞因子的生物学作用 刺激造血及免疫细胞分化发育 介导固有免疫 介导适应性免疫 神经—内分泌—免疫网络等 按功能分: 白细胞介素（IL） 肿瘤坏死因子（TNF） 干扰素（IFN） 集落刺激因子（CSF） 生长因子（GF） 趋化因子（Chemokine） 细胞因子的分类 在进行造血细胞的体外研究中，发现一些细胞因子可刺激不同造血干细胞，在半固定培养基中形成细胞集落，这类因子被命名为集落细胞因子（CSF） 集落刺激因子 细胞因子 产生细胞 效应 Multi-CSF 活化的T细胞 刺激造血干细胞增殖，促进肥大细胞，嗜酸、嗜碱粒细胞增殖分化 GM-CSF 活化的T细胞，巨噬细胞，纤维母细胞等 刺激粒细胞，巨噬细胞集落形成刺激粒细胞功能 G-CSF 纤维母细胞，骨髓基质细胞，膀胱癌细胞株 刺激粒细胞集落，刺激粒细胞功能 M-CSF 巨噬细胞 刺激巨噬细胞集落、刺激粒细胞功能，降低血胆固醇 SCF 纤维母细胞，骨髓和胸腺的基质细胞 刺激髓系、红系、巨核系及淋巴系造血祖细胞 Epo Ⅰ型细胞、肝细胞等 刺激红系造血祖细胞 LIF 基质细胞、单核细胞 促进某些白血病细胞株的分化促进胚胎干（ES）细胞的增殖，抑制ES细胞的分化 定义：促红细胞生成素( erythropoietin, Epo)是特异性作用于红系祖细胞的糖蛋白激素。 基因：人类 Epo基因定位于7号染色体长臂22区(7q22)。由 4个内含子和 5个外显子组成。 结构：天然存在的 EPO 分为两种类型 , α型含35 %的糖基 ，β型含 26 %的糖基。两种类型在生物学特性、抗原性及临床应用效果上均相同。人类EPO含有166个氨基酸 ,相对分子质量为34 400 ，hEPO上有4个半胱氨酸(7,29,33,161)，在7—161，29—33之间以二硫键相连, 这对维持hEPO的生物学活性有重要作用。 EPO—基本概念 产生细胞：1993年Maxwell等通过免疫双标记和免疫电镜证实，Epo生成细胞是肾间质中位于毛细血管与耗氧小管之间的形态学定义的Ⅰ型细胞，Ⅰ型细胞包括两种不同的细胞群即成纤维细胞和树枝状细胞。肝脏是胎儿时期Epo合成的主要器官，也是成人肾外合成Epo的主要器官。 大约90%的EPO由肾小管旁间质细胞分泌。正常人血浆EPO水平维持在15-20IU/ L。 EPO 的生成 调节因素：EPO的产生由组织的氧合状态调节，低氧可刺激Epo的产生从而调节红细胞的生成。 最主要的调节因子是低氧诱导因子-1α (HIF-1α)，它是至少 20个与红细胞生成和血管发生有关基因的转录激活子，包括 EPO、转铁蛋白、血管内皮生长因子 ( VEGF) 以及一系列葡萄糖代谢的重要基因。EPO在机体缺氧时由转录因子复合物- HIF诱导上调, 以调节红细胞生成, 从而使机体适应低氧状态(如高原、贫血等)。 而钴、锰、镍等过渡元素的离子、铁的螯合剂也能刺激 Epo的产生。 调节红细胞生成 促进红系祖细胞的增殖、分化和成熟。早期红系祖细胞( BFU-E) 增殖受 Epo、IL -3、M-CSF多种因子的调控；晚期红系祖细胞( CFU -E)的增殖分化主要由Epo调节。此外，Epo还有抗氧化稳定红细胞膜的作用，改善红细胞膜脂流动性和蛋白质构象，促进膜Na-K ATP酶的活力，维持膜内外正常渗透压。 抗凋亡作用 抗炎作用 抗氧化作用 促血管生成作用 调节人体免疫系统功能 促细胞生成素的生物学作用 基因重组人促红细胞生成素（erythropoietin,EPO） EPO是最早发现并首先运用于临床的造血生长因子， 1985年成功表达了重组人促红细胞生成素(rhEPO)。rhEPO成为当前研究开发最成功的基因工程药物。 生产流程：以胎肝染色体DNA或胎肝mRNA，逆转录合成cDNA文库，进行文库筛选，得到人红细胞生成素基因，将人红细胞生成素基因与表达质粒重组，导入哺乳动物细胞，经筛选得到表达人红细胞生成素的细胞株，克隆并提纯rhEPO。 常用的宿主细胞为中国仓鼠卵巢细胞系（CHO）。 种类 第一代ESA：即重组人红细胞生成素，目前国内临床上常用的有重组人红细胞生成素α和重组人红细胞生成素β两种类型。α：益比奥、佳林豪、济脉欣、怡宝、利血宝；β：罗可曼 第二代ESA：达依泊汀α。Aranesp 第三代ESA：持续型EPO受体激活剂CERA。 新一代的ESA具有