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抗体ProteinA纯化
ProteinA柱子的制备
配制溶液；
结合／洗涤缓冲液：NaCl，0.5M ；Na2HPO4 ，20mM ；PH8.0。
配制500ml的方法：
称取NaCl 4.383g，Na2HPO4 3.5814g溶解于450ml的双蒸水中。调节PH为8.0,补加双蒸水至总体积500ml。
2. 制备空柱子
（1）先打开用过的PD-10上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用PBS清洗3次。
（2）用胶带固定好PD-10空柱子，要求垂直放置。
（3）在PD-10空柱子里加入2ml的Binding Wash buffer.结合缓冲液。
（4）ProteinA填料混匀，（10ml包装一小瓶）。
（5）加入5ml的ProteinA到柱子中。
（6）
（7）
（8）
二．纯化步骤
样品准备；将兔血清与结合缓冲液1：1混合，过滤（防止堵塞柱子）。
平衡柱子：用5-10倍体积的结合缓冲液过Protein A柱。
上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。
洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。
收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约3-4ml/管），直至漏出液中不含蛋白。测定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。（注意：收集管中需事先加入约150ul的1M PH9.0 Tris-HCl缓冲液，防止抗体在过酸的环境下失活）
柱子再生：用5-10倍体积的再生液再生柱子。
PBS透析收集的抗体。
三．试剂的制备
1. 结合缓冲液1000ml 500ml
甘氨酸 112.6g 56.3g
氯化钠 175.2g 87.6g
氢氧化钠调PH至9.0
2. 洗脱缓冲液500ml
甘氨酸 7.507g
用盐酸调PH至3.0
3. 再生缓冲液500ml
甘氨酸 7.507g
酸调PH至2.0
4.称取12.1gTris碱，加80毫升的双蒸水，溶解后用盐酸调节PH8.0，补加到水100毫升，
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