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活体生物发光成像技术 武 烨 2011.06.16 ——A549-luc小鼠肺癌移植瘤模型 1 活体生物发光成像技术(Optical in vivo Imaging) 生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence); 荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA; 荧光报告集团(GFP, RFP, Cyt及dyes等)进行标记。 荧光照相机(charge coupled device camera, CCD camera)及其分析软件和作为报告子的荧光素酶(lsuciferae)和荧光素(luciferin)组成。 优点： 无创性； 可多次重复在不同时间点检测； 快速扫描成像； 实验动物整体成像。 2 技术原理 标记原理 氧化反应：Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，当 外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素(luciferin)，即可在几分钟内产生发光现象。 反应条件：ATP, O2。 光的强度与标记细胞的数目线性相关。 分子生物学克隆技术：基因插入——单克隆细胞筛选——稳定表达细胞株。 光学原理 检测波长范围：400-950 nm荧光 最少可检测到皮下500个细胞 相同深度检测到发光强度和细胞的数量有较好的线性关系 3 实验过程 构建单克隆细胞株A549-luc Pgl4.17[luc2/neo]质粒转染