复合交联酶聚集体的制备及催化羰基不对称还原合成手性醇.PDFVIP

Ｖｏｌ．３９ 高等 学校 化 学 学报 Ｎｏ．１ ２０１８年１月 　 　 　 　 　 　 ＣＨＥＭＩＣＡＬＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＩＥＳ　 　 　 　 　 　 ５４～６３ ｄｏｉ：１０．７５０３／ ｃｊｃ 　 　 复合交联酶聚集体的制备及催化羰基 不对称还原合成手性醇 １ １ ２ ２ １，２ 杨　 猛 ，江惠娟 ，宁晨曦 ，魏东芝 ，苏二正 （１ 南京林业大学轻工与食品学院，南京２１００３７； ２ 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海２００２３７） 摘要　 尝试建立一种复合交联酶聚集体辅酶再生方法． 以Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐ． 酮还原酶ＫＲＥＤ ３０ 和Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｄ⁃葡萄糖脱氢酶ＧＤＨ １为模式酶，通过对沉淀剂类型、戊二醛浓度、交联温度和时间的优化，制备了 高活力复合交联酶聚集体． 酶学性质研究结果表明，与自由酶混合物相比，复合交联酶聚集体的稳定性和底 物耐受性得到明显提升． 催化性能研究结果表明，仅添加少量辅酶启动反应，在水相体系中复合交联酶聚集 体可有效催化４⁃氯乙酰乙酸乙酯（ＣＯＢＥ）和间氯苯乙酮（ＣＰＯ）还原合成手性醇，连续催化 １０次，残余活性 仍保留７０％以上；在双相体系中，复合交联酶聚集体的催化性能更加优越，催化ＣＯＢＥ 的总转化数（ＴＴＮ）达 到６５９５，催化ＣＰＯ的ＴＴＮ达到７５００． 结果表明，复合交联酶聚集体是一种可行的辅酶再生方法． 关键词　 酮还原酶；Ｄ⁃葡萄糖脱氢酶；辅酶再生；复合交联酶聚集体；手性醇 中图分类号　 Ｏ６２１　 　 　 　 文献标志码　 Ａ 光学活性手性醇是手性碳上连有羟基的一类化合物，作为一种可以引入手性中心的重要砌块，其 ［１～３］ 在药物、精细化学品、农用化学品和其它特殊材料的合成领域中应用广泛 ．在工业生产中通常倾向 于使用更加成熟的化学方法合成手性醇，但目前采用的化学合成途径均受限于价格高昂的贵金属催化 ［１］ 剂、高的污染指标和相对较高的设备要求 ． 而反应条件相对温和、光学纯度更高以及更为廉价的生 物合成方法则体现了较高的应用价值［１，２，４］． 手性醇的生物法合成多使用水解酶、裂合酶和羰基还原酶 来完成． 水解酶在工业酶催化中非常重要，其中脂肪酶作为水解酶的一种，可以催化酯类或类似羰基 ［５，６］ 衍生物中Ｃ—Ｏ键的裂解合成手性醇 ． 绝大多数情况下，这种手性醇的合成是基于消旋底物的动力 学拆分． 裂合酶催化Ｃ—Ｃ键生成，以酮或醛作为底物生产手性醇类化合物，如应用苯甲醛裂解酶通过 ［７］ 催化两分子乙醛生成羟基酮 ． 立体选择性羰基还原酶（ＥＣ １１１１８４）属于短链醇脱氢酶／ 还原酶家 族，能够立体选择性催化前手性酮不对称还原合成手性醇．该方法因具有理论产率高、选择性好、副产 ［８］ 物少、反应条件温和及环境友好等优点而成为手性醇绿色合成的优选途径 ． 羰基还原酶的一大特点是需要吡啶核苷酸辅酶来协助完成催化过程． 由于该辅酶非常昂贵，按摩 尔质量比供给反应成本高昂，并不现实． 因此，许多辅酶的原位再生方法被设计出来，用于在较低的初 始辅酶投量下完成目的催化过程［９，１０］． 辅酶原位再生不仅有效降低了立体选择性酶法还原的成本，还 简化了后续的产物分离操作． 目前，用于辅酶再生的策略有全细胞法、游离酶法、酶共固定化法、 电化