第五章 植物组织培养实际应用技术.ppt

. (3)草莓脱毒常见方法 1)热处理脱毒。 2)微茎尖脱毒。 3)花药培养脱毒。 (4)草莓病毒鉴定方法 目前草莓病毒检测的主要方法是指示植物小叶嫁接鉴定法。 （5）草莓的离体繁殖技术 1）外植体的选取、灭菌和接种 下午取草莓匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2-4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5%次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透。在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度。 2）初代培养 培养基：MS+BA0.25+NAA0.25 培养条件：22-25℃，光照16-18h，3000lx 3）继代培养 继代培养基以MS为基本培养基，附加6-BA0.5-1.0mg/L。培养温度22-25℃，日照10-16h，光强1000-3000Lx。 4）生根培养 生根培养基一般采用MS或1/2MS，培养基中加入NAA0.1-0.5mg/L或IBA1.0 mg/L，使发根整齐。培养条件：温度20-25℃，光照时间12h/d，光照强度1500-2000Lx。 5）驯化移栽与移栽 用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带琼脂培养基。事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂。栽前压实，浇透水，用竹签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合。 5.3.2 葡萄 （1）形态特征与生物学习性 葡萄为葡萄科（Vitaceae）葡萄属（Vitis）属落叶木质藤本植物。有卷须茎与叶对生，单叶互生，近圆形叶或卵型，3-5裂，基部心形。圆锥花序。浆果多为圆形或椭圆，色泽随品种而异，被白粉。 （2）葡萄离体快繁技术 1）外植体的选取、灭菌和接种 从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取1-2㎝的茎尖。除去幼叶后在5%次氯酸钠溶液中浸泡2-3min，用无菌水冲洗3次，再在0.1%升汞溶液中浸泡约2min，用无菌水冲洗4次。在无菌条件下分离出约2㎜长的茎尖，接种到培养基上。 2）初代培养 培养基：以MS培养基（无机盐减半为好），再添加BA1.0-2.0mg/L，NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%。 培养条件：25±2℃，接种1-2周暗培养，2周后光照12-16h/d，光照强度1000-3000Lx 3）继代培养 将初始培养产生的密集生长的芽丛，转入继代培养基MS+BA0.5mg/L+GA30.2mg/L，则经1个月的培养，就可长成2-3㎝高的幼茎。 4）壮苗与生根培养 壮苗生根培养基：1/2MS+IBA0.1-1.0mg/L中进行生根培养。 培养条件:23±2℃，16h/d，2000-3000Lx。培养10-15d后幼苗开始生根，1个月形成完整的根系，同时具备5-6片新叶，生根率一般在90%以上。 5）驯化移栽与移栽 春夏季对试管苗进行强光照2500-3000 Lx培养1周，打开瓶盖，自然光下炼苗3-7d，待叶片油量、幼茎呈淡红色时，将生长势强、根系粗壮的试管苗从培养瓶中取出，洗去根上的培养基，移栽到消毒蛭石基质内，盖上塑料薄膜，保存相对湿度80%-90%，最初3d保存（25±2）℃，后期保存（25-28）℃。经7-10d锻炼适应后可去掉塑料薄膜，相对湿度维持70%-80%，则移栽成活率在90%左右。 5.3.3 马铃薯 （1）形态特征与生物学习性 茄科茄属多年生草本。 马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎4℃下发芽，发芽适温为12-18℃。地上茎叶生长温度为17-21℃，25℃以上时生长不良，叶变小，超过30℃和7℃以下茎叶停止生长，-1℃时受冻。块茎形成要求昼温14-24℃，夜温12-14℃，土温16-18℃。结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥活以及通气良好的土壤条件。 （2）马铃薯病毒检测鉴定方法 1）汁液鉴定法 在马铃薯的病毒鉴定中，指示植物汁液鉴定法是最常用的方法，马铃薯X病毒、马铃薯S病毒和纺锤块茎类病毒很容易通过汁液来接种。马铃薯Y病毒、马铃薯M病毒和马铃薯A病毒等也可用此法来接种。 2）分子生物技术 （3）马铃薯的离体快繁技术 1）外植体的选取、灭菌和接种 挑选新鲜的马铃薯块茎。将消毒后的材料放在10～40倍的双筒解剖镜下，用解剖针剥去外部幼叶和大的