【2019年整理】植物组织培养的理论基础.pdfVIP

11.1 植物组织培养的理论基础（重点在概念） 植物细胞工程的概念 (Definition of plant cell engineering) ：植物细胞工程是植物生物技术的一 个重要组成部分， 是在离体培养条件下， 在细胞水平上对植物材料进行遗传操作的技术， 即 对植物体的任何一个部分（器官、组织、细胞、原生质体）进行离体诱导使其称为完整植株 的技术。 细胞全能性 的一般概念：每个细胞都含有个体的全部遗传信息，都有分化成一个完整生物 个体的固有能力称之为细胞的全能性。 植物细胞全能性表现根据细胞类型不同从强到弱 : 营养生长中心 形成层 薄壁细胞 厚壁细胞 (木质化细胞 ) 特化细胞 (筛管、导管 细胞 )； 根据细胞所处的组织不同从强到弱为： 顶端分生组织 居间分生组织 侧生分生组织 薄壁组织 (基本组织 ) 厚角组织 输导组织 厚壁组织。 所谓 细胞分化 ，是指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 分化细胞在一定条件下，可以转变为胚性状态，重新获得分裂能力，称为 脱分化 。 外植体： 植物组织培养中用来进行无菌培养的离体材料，可以是器官、组织、细胞和原生 质体等。 脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为 愈 伤组织 。 愈伤组织的种类 :胚性愈伤组织 （Embryonenic callus ）和非胚性愈伤组织： 细胞的再分化 （redifferentiation) 是脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在一定条件下，重新 分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株。 由愈伤组织再分化形成再生植株， 可经过器官发生和胚状体发生两条途径 。 通过 器官发生形成再生植株 大体上有 三种方式 ： 第一种方式是先芽后根； 第二种方式为先根后芽； 第三种方式是在愈伤组织的不同部位 形成芽和根，再通过维管组织的联系形成完整植株。 一般认为，芽和茎原基通常起源于培养组织中比较表层的细胞，即 外起源 ，而根原基则发 生在组织较深处，是 内起源 。 影响器官分化的因素 1.外植体 - 位置、状态及组织类型 2.生长调节剂 3.光照 4.温度 培养细胞变异的类型 1、自发产生的变异， 2 、诱发产生的变异， 影响离体培养细胞遗传变异的因子 1、供体植株 倍性水平、基因型、外植体细胞的分化程度 2、培养基及培养方式 培养基的成分、物理状态及培养类型 原生质体培养的体细胞变异大于细胞培养的变异，而细胞培养的变异又大于组织器官培养 的变异 3、继代培养的次数 一般来讲，继代时间越长、继代次数越多，细胞变异的几率就越大。 优良变异的筛选方法 （1）直接筛选法 (2) 间接筛选法 体细胞无性系变异的利用 1．创造育种中间材料或直接筛选新品种 2．遗传研究 3．发育生物学研究 4．生化代谢途径研究 变异的抑制 1、利用比较稳定的品种材料。 2、利用茎尖、幼胚等再生能力较强的组织进行培养。 3、 避开使用高浓度激素。 4、不经过愈伤组织，而直接从脱分化细胞再生。 5、尽量促使植株早再生，使培养时间缩短。 11.2 植物组织培养（重点在无菌操作） 简述植物离体培养中无菌操作过程。 1、实验器具和材料的准备 2、用 75% 的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌 20min-30min 。 3、关紫外灯、打开风机，过 5-10min 进入缓冲间，以 75% 洗手和手臂，更换无菌服、帽子 和口罩。进入接种室。 4、用 70－75 ％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将 金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。 5、取流水冲洗（至少 30min ）过的外植体，用一定