IPTG诱导的外源蛋白表达.pptVIP

. IPTG诱导的蛋白表达调控 1. 课题来源： 实验步骤： 接种 扩大培养 IPTG诱导 蛋白提取、纯化 思考： IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用原理？ 2. IPTG的作用原理 IPTG (isopropylthiog- alactoside,异丙基硫代半乳糖苷): 化学合成的乳糖类似物，很强的β －半乳糖苷酶诱导剂，诱导乳糖操纵元(lac operon)的开放，自身不被催化分解。类似的X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被β－半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作 β－半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。 2. IPTG的作用原理 2.1 乳糖操纵元（lac operon） 大肠杆菌利用乳糖至少需要需要两个酶：促使乳糖进入细菌的乳糖透过酶(lactose permease)和催化乳糖分解第一步的β －半乳糖苷酶(β -galactosidase)。 在环境中没有乳糖或其他β-半乳糖苷时，大肠杆菌合成β-半乳糖苷酶量极少，加入乳糖或其类似物2-3分钟后，细菌大量合成β -半乳糖苷酶，其量可提高千倍以上，在以乳糖作为唯一碳源时，菌体内的β-半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的3%。 2.1 乳糖操纵元（l