医学细胞培养技术培训课件.ppt

（二）细胞来源 1. 原代培养 从机体上取下细胞、组织或器官，让它们在体 外维持与生长。（实际中，传 10 代以内的细胞用作 原代培养细胞） 特点：表现来源组织或细胞特征。 三、培养细胞技术 （二）细胞来源 （ 1 ） 组织块培养法 从机体上取下组织，使其在体外维持与生长， 细胞从组织块边缘向外长出，铺满培养瓶（皿）， 即可进行传代。 特点：表现来源组织或细胞特征。 三、培养细胞技术 （二）细胞来源 （ 1 ） 组织块培养法 基本过程： 无菌条件下，取组织，去掉组织表面血污 剪成小块（ 0.5 ～ 1 mm 3 ） 反复漂洗 （ Hanks 液和完全培养液） 接种于培养皿，培养箱培养 长满后传代 三、培养细胞技术 （二）细胞来源 （ 2 ） 消化培养法 与组织块培养法区别： A. 用酶制剂处理组织块，除去细胞间质，使 细胞分离，形成细胞悬液； B. 细胞生长方式多为单层。 优点：更易摄取营养、排除代谢产物生长较快。 缺点：操作繁杂，易污染；消化可能对细胞有 损伤。 三、培养细胞技术 （二）细胞来源 2. 细胞系（ cell line ） 原代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即 称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为 有限细胞系（ Finite Cell Line ）；已获无限繁殖能 力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞 系（ Infinite Cell Line ）。无限细胞系大多已发生异 倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞， 因此本质上已是发生转化的细胞系。 三、培养细胞技术 原代培养细胞的生命归宿 ? 原代培养期 ? 传代期 ? 衰退期 （二）细胞来源 3. 细胞株（ cell strain ） 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培 养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群， 称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性 状不同的细胞群，亦可称之为亚株（ substrain ）。 细胞库： 美国菌种保藏中心（ ATCC ） / 中国典型培养物保藏中心 上海细胞库 各科研机构 三、培养细胞技术 培养细胞的特性 培养细胞的生长方式 ? 贴附生长： 必须贴附于支持物表面才能生长。大多数 细胞属此型。失去在体内特有形态。 – 成纤维细胞型、上皮细胞型、游走型、多形 型。 ? 悬浮生长： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物 表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。 每代贴附生长细胞的生长过程 ? 游离期 ? 贴壁期 ? 潜伏期 ? 对数生长期 ? 停止期（平台期） ? 游离期： ? 细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称 悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。 ? 10 分钟一 4 小时 ? 贴壁期： 细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株 平均在 10 分钟一 4 小时贴壁。 ? 底物 ：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等 ? 血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤 粘素、胶原等糖蛋白（ 生长基质 ），这些带正 电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上， 悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。 ? 进口塑料培养瓶涂有 生长基质