如何确认RNA提取后的质量电子教案.docVIP

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  • 2020-05-08 发布于浙江
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如何确认RNA提取后的质量 精品文档 精品文档 收集于网络,如有侵权请联系管理员删除 收集于网络,如有侵权请联系管理员删除 精品文档 收集于网络,如有侵权请联系管理员删除 一般通过总量,纯度与完整性三大项检测来确认RNA质量: 1总量:微量 分光光度计测260nm吸收值计算。 2纯度:微量 分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值,用于评估有机溶剂残留;260nm/280nm吸收值的比值,用于评估蛋白质污染比例。 3完整性:以Agilent Bioanalyzer进行 毛细管电泳(capillary electrophoresis),并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估,10为RNA完整性最好,0为最差。 RNA质检参数中260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。其中: A230: 测定其它碳源物质,如酚,糖类等。 A260:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA,引物等的浓度用的。 A280:蛋白质的吸收峰。 一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范围内时,我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不过要注意,当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时,R 值可能会大于 2(一般应该是2.2的)。当R 1.8时,溶液中蛋白的污染比较明显,可以根据自

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