全自动细胞荧光分析仪对细胞精确计数及活力分析.pdf

Countstar? Rigel全自动细胞荧光分析仪对 PBMC细胞精确计数及活力分析 一、 PBMC细胞浓度与活力分析的重要性 外周血单个核细胞（ Peripheral blood mononuclear cell,PBMC) 即外周血中具有单个核的细胞， 主要包括淋巴细胞、单核细胞、吞噬细胞、树突状细胞和其他少量细胞类型，是机体免疫 应答功能的重要细胞组成。 PBMC 是免疫学、抗体药物研发、传染病、恶性血液肿瘤疾病、 干细胞移植、疫苗开发以及移植免疫等领域学者经常需要的研究原材料。 PBMC的浓度、 活力、免疫细胞亚型分布及细胞因子等都是监测机体免疫状态及其他领域研究的重要指标。 所以如何精确计数 PBMC细胞在科研和临床上都有重要的意义。 二、目前 PBMC 细胞分离、计数的方法与痛点 1、根据外周血各种血细胞的密度不相同， PBMC细胞分离方法主要密度梯度离心法，然后 根据实际情况添加红细胞裂解液除去部分残留红细胞。 2、由于个体及分离效果差异，导致分离后的 PBMC样本中红细胞和血小板的残留程度不 同。用血球计数板在显微镜下计数是最常见的一种计数方法，由于显微镜下观察红细胞与 PBMC细胞大小差异不大，肉眼很难辨别，经验丰富的操作者需通过不停调节焦距观察红 细胞的双凹状的形态来区分。这个过程无疑造成了非常大的工作量及误差。 3、目前常用的计数方法包括血球计数板台盼蓝染色计数法、库尔特法及荧光细胞计数法。 其中台盼蓝染色法与库尔特法均无法很好的区分红细胞与白细胞。 三、 Countstar? Rigel细胞荧光分析仪对 PBMC细胞精确计数及活力分析 原理：利用 AO/PI 双荧光染色法进行 PBMC死活细胞精确计数。吖啶橙（ Acridine orange,AO）和碘化丙啶（ propidiumiodide,PI ）都可以对死、活细胞核中的 DNA 进行染色。 所以该方法可以排除无核的细胞碎片、成熟的血小板及红细胞干扰，从而更准确计数 PBMC细胞。 （1 ） Countstar Rigel 对 PBMC 的计数结果 Figure 1 分离后 PBMC细胞计数图片 8.00E+06 y = 7E+06x + 6782.6 7.00E+06 2 R = 0.9994 6.00E+06 5.00E+06 y = 7E+06x - 164087 2 R = 0.9994 4.00E+06 3.00E+06 2.00E+06 1.00E+06 0.00E+00 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 总细胞浓度 活细胞浓度 线性 (总细胞浓度 ) 线性 (活细胞浓度 ) Figure 2 分离后 PBMC 细胞梯度稀释后线性结果 （2 ） Countstar? Rigel 对全血样本中 PBMC 细胞浓度及