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美国应用生物系统中国公司 技术服务部 关于本教程的说明: 本教程为应用生物系统中国公司为在中国使用的客户培训的辅助材料。 本教程仅提供给经过应用生物系统中国公司培训合格的操作人员使用。 本教程内容仅限于Analyst软件基本操作和应用部分。 本教程提供的分析方法仅对用户起参考作用。 本教程解释权在美国应用生物系统中国公司。 版本号:A 目录 1、定量分析简明流程 2、成功定量分析应注意的问题 3、定性分析原则与方法 4、LC-MS实验经验与仪器维护常识 5、Analyst软件操作简介: Calculator功能与使用 Library功能与使用 部分Script功能与使用 其他 6、Analyst软件QTRAP功能基本操作简介: QTRAP扫描速度的校正 QTRAP系统的扫描方式 QTRAP系统IDA指南 7、部分化合物液质分析参考方法和信息 8、压力单位转换表 LC-MS/MS定量分析简明教程 首先确认仪器已经校准,气体、电压工作正常 一.溶液配制 分别将待分析化合物的标准物质配制成1~10 ppm (1~10ug/ml 的溶液,用于注射泵连续进样,以优化质谱参数。 二.Q1 Scan,确定母离子 a.选择或建立Project 选择Project 建立一个新项目 (Project: 点击Tools→Project→Creat Project,出现下图对话框,键 入项目名称,点击“Add All” 添加项目功能,点击OK,完成。 b. 硬件配制:激活MS主机,如果是API2000、3200,硬件配置文件中的质 谱主机中应选择Integrated Syringe Pump。 c. 进入MS的Manual Tuning界面,并设置注射泵流速5~10ul/min。 d.选择质谱扫描方式:Q1 Scan,设置扫描范围(应包含待分析的化合物;根据化合物性质,选择扫描极性 e.手动调节DP、GS1等参数,使喷雾平稳、待分析化合物信号灵敏度较高 f.MCA on,点击Acquire,采集并存储20~50张加和图谱(根据灵敏度,并保存方法,例如:Q1.dam g.在质谱图区域,点击右键-“Open File”打开图谱,局部放大,确定母离子的质荷比,准确到0.1amu。,如下图,母离子m/z应为609.3。 二.Product Ion Scan,确定子离子 以第一步测得值为母离子,做Product Ion Scan(MS2,手动调节CE等参数,使母、子离子都具有一定强度,一般以母离子的强度占图谱中基峰强度的1/3到1/4为宜。 基峰离子 母离子 MCA on,点击Acquire,采集并存储20~50张加和图谱,并保存方法,例如: 609-MS2.dam。 在质谱图区域,点击右键“Open File”打开图谱,选择2个最高的子离子,如上图中,选择195、397,局部放大,确定子离子的质荷比,准确到0.1amu,则上面两个子离子为195.2、397.3。 三.MRM,优化质谱中与化合物相关的参数 以前两步选定的母离子、子离子,组成离子对,例如609.3/195.2,609.3/397.3 等,做MRM Scan,每个离子对的分析时间100或200ms。 通过Edit Ramp,分别优化Compound项下的各参数,如DP、EP、CE、CXP 等:点击Edit Ramp,选择要优化的参数→点击OK,出现该参数的优化窗口,可以根据需要改变该参数的优化范围(Start、Stop和优化步长(Step。不同参数需逐一优化。 然后保存方法,例如609-MRM.dam。 同样步骤,优化需要分析的另外化合物,分别保存方法。 四、将MRM方法转化为液质联用方法 关掉所有质谱分析界面,将现有质谱体系灭活,激活液相色谱、质谱设备。 单击Acquire中Build Acquire Method,打开上面保存过的MRM方法,右键显示方法左边导引条中第一行Acquire Method,点击Add/Remove Device Method 添加设备:色谱泵、自动进样器 选中方法左边导引条中第一行Acquire Method参数页,设置色谱同步。 设置色谱参数,分析时间一般为0.8~1min,流动相组成和流量与实际样品分析时相同;修改质谱分析时间 (Duration,一般设置0.8~1min,与色谱参数一致;设置GS1、GS2、TEM初始值为40、40、400左右,保存方法,例如: LC-MRM.dam。 五、源参数优化 将上面用过的样品溶液稀释100~1000倍。 在Tune项下,双击 Quantitative Optimization,选择FIA分析,根据向导进 行自动优化。 注意:需要优化的各可选值之间用“;”分隔。 五.色谱条件优化