乳中菌落总数的测定.pptVIP

乳中菌落总数的测定 菌落总数主要是作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用菌落总数测定这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便为对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得lg或1mL检样中所含细菌菌落的总数。 不同的细菌具有不同的生理生化特征，也就是说不同的细菌具有不同的酶系统，因而它们对碳水化合物、含氮化合物、矿质元素、生长因素的需求不一样，代谢途径、代谢产物及其它生理特征，诸如，温度、对氧气的要求、pH、对氰化物的敏感性等也不尽相同。所以，培养时，应该用不同的营养条件及其他生理条件去满足其要求．才能分别将各种细菌都培养出来。 在实际工作中，只用一种常用的方法进行细菌菌落总数的测定，所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧的菌落总数。 一、设备和材料 (1)温箱；(36士1)℃。 (2)冰箱：0～4℃。 (3)恒温水浴：(46-1-1)℃。 (4)天平。 (5)电炉。可调式。 (6)吸管。容量为lmL和10mL，标有0.1mL单位的刻度。 (7)广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml。 (8)玻璃珠：直径为5mm 。　 (9)平皿：皿底直径为9cm。 (10)试管l 18mmX 200mm。 (11)酒精灯。 (12)乳钵或均质器。 (13)试管架。 (14)灭菌刀或剪刀。 (15)灭菌镊子。 (16)酒精棉球。 (17)玻璃蜡笔。 二、培养基和试剂 (1)营养琼脂培养基。 (2)75％乙醇。 (3)生理盐水：浓度0.85％。 三、操作步骤 (1)以无菌操作，将检样25g(或25mL)磨碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量玻璃珠)，经充分振摇作成1+10的均匀稀释液。 (2)用lmL灭菌吸管吸取1+10稀释液lmL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管混合均匀，作成l+100稀释液。 (3)另取lmL灭菌吸管，按上项操作顺序作十倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支lmL灭菌吸管。 (4)根据食品卫生标准要求或对样品污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做十倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移lmL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 (5)稀释液移入平皿后，应及时将凉至4612营养琼脂培养基(可放置于(46士1)℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。 (6)待琼脂凝固后，翻转平板，置(36士1)℃温箱内培养(48士2)h取出，计算平皿内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克(或每毫升)样品所含菌落总数。 四、菌落计数方法 作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。 五、菌落计数的报告 (1)平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)若仅有一条链，可视为一个菌落，如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 (2)稀释度的选择 ①应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告结果(如表1例1)； ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数I若大于2．则报告其中较小的数字(如表1例2及例3) ③若所有稀释度的平均菌落数均大于300．则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告结果(如表1例4) ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告结果(如表1例5) ⑤若所有稀释度均无菌落生长，以小于1乘以最低稀释倍数报告结果(如表l例6)， ⑥若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告结果(如表1例7)。 (3)菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字．在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(如表1)。 表1稀释度选择及菌落数报告方式 项目一 基础知识（一） 典型乳品生产与实训