超广谱β内酰胺酶测定标准操作规程.doc

超广谱β内酰胺酶测定标准操作规程 1．目的 规范肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）筛选和确证试验。 2．适用范围 本操作规程适用于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌。 3．选药原则 在本规程所列受试抗菌药物主要根据现行版本的CLSI M02和M100选择ESBLs筛选和确证试验所需的药敏纸片。 4．质控 纸片药敏试验应使用大肠埃希菌ATCC 25922和肺炎克雷伯菌ATCC 700603进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。肺炎克雷伯菌ATCC 700603可接受的抑菌圈范围为： 头孢泊肟（10μg）抑菌环9~16mm 头孢他啶（30μg）抑菌环10~18mm 氨曲南（30μg）抑菌环9~17mm 头孢噻肟（30μg）抑菌环17~25mm 头孢曲松（30μg）抑菌环16~24mm 5．材料和仪器 M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺。 6．操作步骤 参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7．判断标准 见表5-53. 表5-53 纸片法检测克雷伯菌、大肠埃希菌和奇异变形杆菌超广谱β-内酰胺酶 方 法 初步筛选试验 表型确证试验 培养基 Mueller-Hinton琼脂 Mueller-Hinton琼脂 抗微生物药物纸片浓度 肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌：头孢泊肟10μg或头孢他啶30μg或氨曲南30μg或头孢噻肟30μg或头孢曲松30μg 奇异变形杆菌： 头孢泊肟10μg或头孢他啶30μg或头孢噻30μg 使用一种以上的药物进行筛选将会提高检测的敏感性 头孢他啶30μg，头孢他啶/克拉维酸30/10μg和头孢噻肟30μg，头孢噻肟/克拉维酸30/10μg 确认试验需要同时使用头孢噻肟和头孢他啶，单独和联合克拉维酸的复合制剂 接种 按标准纸片扩散法的规定进行 按标准纸片扩散法的规定进行 孵育条件 35℃空气 35℃空气 孵育时间 16~18h 16~18h 判读结果 肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌： 头孢泊肟抑菌圈直径≤17mm 头孢他啶抑菌圈直径≤22mm 氨曲南抑菌圈直径≤27mm 头孢噻肟抑菌圈直径≤27mm 头孢曲松抑菌圈直径≤25mm 奇异变形杆菌： 头孢泊肟抑菌圈直径≤22mm 头孢他啶抑菌圈直径≤22mm 头孢噻肟抑菌圈直径≤27mm 上述抑菌环直径提示菌株可能产生ESBLs 2个药物中有任何一个，在加克拉维酸后，抑菌环直径与不加克拉维酸的抑菌环相比，增大值≥5mm时，判定为产ESBLs（例如，头孢他啶的抑菌环=16mm；头孢他啶/克拉维酸的抑菌环=21mm） 质控意见 当执行ESBL筛选试验时，肺炎克雷伯菌ATCC 700603被用于质量评估（如训练，能力或试验评价），肺炎克雷伯菌ATCC 700603或大肠埃希菌ATCC 25922用于常规QC（如每周或每日） 大肠埃希菌ATCC 25922（应在敏感范围） 肺炎克雷伯菌ATCC 700603 头孢泊肟抑菌环9~16mm 头孢他啶抑菌环10~18mm 氨曲南抑菌环9~17mm 头孢噻肟抑菌环17~25mm 头孢曲松抑菌环16~24mm 当执行ESBL确认试验时，肺炎克雷伯菌ATCC 700603和大肠埃希菌ATCC 25922用于常规QC（每周或每日） 大肠埃希菌ATCC 25922：所测试药物联合克拉维酸后的抑菌环直径与单药抑菌环相比，增大≤2mm 肺炎克雷伯菌ATCC 700603： 头孢他啶/克拉维酸抑菌环直径增大≥5mm 头孢噻肟/克拉维酸抑菌环直径增大≥3mm 8．注意事项 只有确定分离到的奇异变形杆菌与临床感染性疾病有关，才需要进行ESBLs的筛选和确证试验。 9．结果解释 见表5-54. 参考文献 [1]CLSI.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;Nineteenth Informational Supplement. CLSI document M100-S19.Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,2009 [2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：