医院检验科微生物检验实验室常用培养基及试剂配制标准操作规程.doc

医院检验科微生物检验实验室常用培养基及试剂配制标准操作规程 营养琼脂配制标准操作规程……………………………………………………………90 血琼脂培养基配制标准操作规程………………………………………………………91 巧克力培养基配制标准操作规程………………………………………………………92 M-H培养基配制标准操作规程…………………………………………………………93 营养肉汤配制标准操作规程……………………………………………………………94 碱性蛋白胨水配制标准操作规程………………………………………………………95 沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程……………………………………96 XXX医院检验科 微生物检验实验室作业指导书 营养琼脂配制标准 操作规程 文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0521 版本生效日期共 1 页 目的 规范营养琼脂培养基配制的操作规程。 2．原理 培养基含有氮源、碳源和微量无机盐，适宜细菌生长繁殖。 3．用途 供细菌培养、菌株纯化及传种使用。 4．配方 营养琼脂干粉28g、蒸馏水1000ml 5.操作步骤 将28g营养琼脂干粉溶于1000 ml蒸馏水中，混匀至完全溶解，分装，经121℃灭菌15分钟，冷藏备用。 6.储存条件 2～8℃冰箱 7.有效期 实验室自行规定，确保培养基质量。 8.质量控制 8.1 质控频度 每次新配制时做质控 8.2 质控方法及结果见表5-17。 表5-17 配制营养琼脂培养基质量控制方法及结果 试验 方法 结果 无菌试验 100块抽检5%，100块随机取10块，35℃培养24～49h 无细菌生长 生长试验 金黄色葡萄球菌ATCC25923，35℃培养24～49h 菌落浅黄色 铜绿假单胞菌ATCC27853 35℃培养24～48h 菌落无色或浅绿色 直径2.7mm 平行试验 平行试验 做质控时 取新旧批号的培养基同时做 9．注意事项 倾倒时温度不易过高，否则冷凝水过多易污染；若温度过低，琼脂易凝固。 参考文献 [1] 谢正旸主编。现代微生物培养基和试剂手册。福州：福建科学技术出版社，1994 [2] 王钦升，周正明，高屹主编。实用医学培养基手册。北京：人民军医出版社，1999 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人： XXX医院检验科 微生物检验实验室作业指导书 血琼脂培养基配制标准操作规程 文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0522 版本生效日期共 1 页 1．目的 规范血琼脂培养基配制标准操作规程，保证培养基质量。 2．原理 羊血或兔血等是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45～50℃的基础培养基中加入血液可以完好保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl浓度提高到0.85%，可使血平皿在35℃培养18～24小时后色泽仍然新鲜。 3．用途 供一般病原菌的分离培养、溶血性鉴别及保存菌种用。 4．配方 特殊蛋白胨23g、淀粉1g，氯化钠5g、琼脂10g、无菌脱纤维羊血（或兔血）5%～10%，pH7.1～7.5。 5.操作步骤 将上述成分混合，溶于1000ml蒸馏水中，加热溶化，校正pH，121℃高压灭菌15分钟。冷却至50℃加入无菌血液，充分摇匀后倾注平板，待凝固后冷藏备用。血琼脂层厚4mm。 6.储存条件 2～8℃冰箱。 7.有效期 实验室自行规定，确保培养基质量。 8. 质量控制 8.1 质控频度 每次新配制时做质控 8.2 质控方法及结果见表5-18. 表5-18 配制血琼脂培养基质量控制方法及结果 试验 方法 结果 无菌试验 生长试验 平行试验 100块抽检5%，100块随机取10块，35℃培养，观察有无细菌生长 化脓性链球菌ATCC19615，35℃，培养18～24小时 肺炎链球菌ATCC6305，35℃，培养18～24小时 金黄色葡萄球菌ATCC25923， 35℃，培养18～24小时 大肠埃希菌ATCC25922，35℃，培养18～24小时 做质控时，取新旧批号的培养基同时做 无细菌生长 生长良好，β溶血 生长良好，a溶血 生长良好，β溶血 生长良好， 9.注意事项 倾注时温度不易过高，否则血细胞易被破坏而溶血；若温度过低，琼脂易凝固。 参考文献 [1] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007 [2] 王钦升，周正明，高屹主编.