微生物检验实验室链球菌属标准操作规程.doc

微生物检验实验室链球菌属标准操作规程 1. 概述 链球菌是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍延用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。 2.标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1 形态与染色：革兰阳性球菌，固体培养基上单个或成双排列，较少呈链状排列；肉汤培养基中呈长链排列；从脓液、尿液和痰液等标本直接涂片镜检，呈单个、成双或短链排列。 3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；B溶血周围有明显较大的完全透明环；。溶血（不溶血）无异常变化。周围有灰绿色的狭窄溶血环；肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色溶血环。 3.3 生化反应：触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球 菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性，Optochin试验敏（抑菌环14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌特征：革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小、可出现：a溶血、B溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群： A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：CAMP试验、马尿酸钠、65g/L氯化钠耐盐试验均为阴性，杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群非肠球菌（马肠链球菌、牛链球菌、变形链球菌等）：胆汁七叶苷试验 阳性，65g/L氯化钠耐盐试验为阴性。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌和坚忍肠球菌等）：胆汁七叶 苷、65g/L氯化钠耐盐试验阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非B溶血链球菌的鉴别见表5-34 表5-34 非B溶血链球菌的鉴定 菌 名 Optochin试验 胆汁溶菌试验 胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌 + + - 牛链球菌 - - + 其他草绿色链球菌群 - - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片染色 观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验 阳性参见触酶试验标准操作规程 3.5.3鉴定 从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件. 5.质量控制 参见《质量控制程序》 6.检验结果解释与分析 6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常不致病，只有但草绿色链球菌出现在血液中等无菌体液中时，鉴定才有意义。 6.2 如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢曲松、头孢吡肟、头孢布坦、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。如果检出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19mm，应检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC浓度，可能发生青霉素耐药或中介现象。如果检出菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。 7.临床意义 A群链球菌（化脓性链球菌）临床上常引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。此外，A群链球菌感染后也可发生急性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。无乳链球菌正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。肺炎链球菌存在正常人群的口腔、鼻咽部、属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常不致病，只有但草绿色链球菌出现在血液中等无菌体液中时，鉴定才有意义。 8. 鉴定流程 触酶试验- 触酶试验- 菌落观察：灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血 涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链排列 β溶血 α溶血 γ溶血 其他链球菌 +CAMP- +Optochin试验- +胆汁溶菌试验- 无乳链球菌 肺炎链球菌 杆菌肽敏感 PYR