微生物检验实验室埃希菌标准操作规程.doc

微生物检验实验室埃希菌标准操作规程 1. 概述 埃希菌属包括大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌5个菌种。大肠埃希菌是埃希菌属的代表种。 2. 标本类型 痰液、脑脊液、穿刺液、脓液、血液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色：革兰阴性杆菌，粗短，大小为（1.1~1.5um）×（2~6um）， 多数有周鞭毛 3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落呈圆形，直径为2~3um，稍凸，边缘整齐，灰白色，不透明，少数菌株产生β溶血环；在麦康凯琼脂平板上形成不透明、红色菌落，部分不发酵乳糖的菌落呈无色菌落，不数呈粘稠状菌菌；在伊红亚甲蓝平板上菌落呈紫黑色，并有金属光泽；在中国蓝琼脂平板上菌落呈蓝色；在XLD琼脂平板上菌落呈不透明黄色；在HE琼脂平板上菌落呈黄色；在CHROMagar大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落，而在CHROMagar尿道菌定位培养基上菌落呈红色。 3.3 生化反应：氧化酶试验阴性，三糖铁琼脂（TSI）为A/A；发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇等多种糖类，产酸产气；IMViC++--（占94.6%），动力试验和硝酸盐还原试验阳性，尿素酶试验、丙二酸盐试验、苯丙氨酸脱羧酶试验均为阴性，大部分菌株不产硫化氢。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌特征 TSI为A/A，发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇等多种糖类，IMViC++--。 3.4.2 与痢疾志贺菌的鉴别：无动力而乳糖迟发酵的菌株，易与痢疾志贺菌相混淆，可通过赖氨酸脱羧酶、醋酸盐试验等和血清分型法区分。见表5-39。 表5-39 大肠埃希菌和志贺菌的鉴别要点（阳性%） 生化反应 大肠埃希菌 不活泼大肠埃希菌 痢疾志贺菌 赖氨酸 90 40 0 醋酸盐 95 30 0 粘液酸盐 98 93 0 甘露醇 95 25 0 乳糖 95 5 0 3.4.3 与肺炎克雷伯菌的鉴别：少数粘液样菌落的大肠埃希菌在麦康凯琼脂平板上易与肺炎克雷伯菌菌落相混淆，大肠埃希菌粘液样菌落呈深粉红色，而肺炎克雷伯菌则呈浅粉红色，无动力，IMViC--++。 3.5 操作步骤 3.5.1 氧化酶试验 参见 氧化酶试验标准操作规程 。 3.5.2 从麦康凯琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见 药物敏感性试验标准操作规程 及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见 质量管理程序 。 6. 检验结果解释与分析 产生超广谱B-内酰胺酶(ESBLs)是大肠埃希菌最主要的耐药机制之一。ESBLs大部分由质粒介导，经典的为TEM型及SHV型广谱酶衍生的超广谱B-内酰胺酶，还包括PER型及CTX型酶等，中国ESBLs基因型的CTX-M型为主。如果检出产ESBLs大肠埃希菌，即使体外药敏试验对青霉素类、头孢菌素类或氨曲南敏感，也应报告对其耐药。对重症感染者首先碳青酶烯类抗生素进行治疗。 7. 临床意义 大肠埃希菌寄居在人和动物的肠道，是肠道的正常菌群。当机体抵抗力下降、该菌侵入肠外组织或器官，可引起急性炎症和继发感染，如胆囊炎、肾盂肾炎、膀胱炎、腹膜炎、败血症等疾病。 8. 鉴定流程 血液、尿液、痰液等 血液、尿液、痰液等 氧化酶- 鉴定并做药敏试验 埃希菌属 麦康凯琼脂平板呈粉红色菌落 参考文献 [1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2008 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：