动物细胞工程复习重点.docVIP

简述卵母细胞成熟的过程：婴儿时期：卵原细胞（位于原始卵泡内）经有丝分裂形成更多的卵原细胞。后者经染色体复制，形成初级卵母细胞（初级卵泡内），进而进行第一次减数分裂（简称减I期），并停留在减I期的前期的双线期。核成熟期：随着机体的生长发育，体内营养、激素水平，特别是激素水平的上升，原来停滞在减I期的初级卵母细胞恢复分裂，初级卵泡也迅速增大，逐渐变为排卵前的次级卵泡。在体内FSH、LH等激素的刺激下，初级卵母细胞彻底完成减I分裂，形成次级卵细胞和第一极体，并随卵泡的破裂排出到输卵管中。第二次减数分裂期：输卵管中的次级卵母细胞一边向输卵管壶腹部进发，一边进行第二次减数分裂（简称减II期），并最终在壶腹部停留在减II期的中期。此时，卵母细胞若受精，则恢复减II分裂至彻底完成减II期，形成受精卵和第二极体，此时卵巢排卵破裂处的黄体持续存在（妊娠黄体），并大量分泌孕激素支持受精卵的发育和着床；若卵母细胞不受精，则暂停在减II期的卵母细胞则凋亡，此时卵巢上的黄体萎缩为白体直至逐渐消退，等待受体内激素水平调控的下一轮排卵周期的开始。 简述成熟卵母细胞的结构与各组分作用：放射冠：由卵丘颗粒细胞组成的层叠状结构，一是起保护作用，形成卵母细胞的外围结构；二是其分泌的一些蛋白质因子等，可通过细胞间的紧密连接结构输送到卵母细胞内，促进卵泡的发育和卵母细胞的成熟。透明带（ZP）：一是对卵母细胞起到赋予弹性的保护结构；二是在受精过程中参与对精子的识别（ZP3）和结合（ZP2），诱发顶体反应；三是通过透明带反应在防止多精受精过程中起重要作用。细胞膜：一是起卵母细胞膜内外物质、信息、能量交换的媒介作用；二是通过卵黄膜反应在防止多精受精过程中起作用。细胞质：主要是指皮质颗粒，皮质颗粒在精子进入卵母细胞内部激活卵母细胞的过程中，迅速与卵黄膜融合，发生皮质反应，进而引发卵黄膜反应和透明带反应，阻止多精受精。其他成分主要是大量mRNA及蛋白质，在受精后激活受精卵的发育和分裂中起到重要作用。 简述精子发生的基本过程：精原干细胞先分化成精原细胞，后者经有丝分裂形成更多精原细胞，精原细胞经染色体复制形成初级精母细胞，后者经过减I期，形成两个次级精母细胞，每个次级精母细胞再经减II期，形成四个精子细胞，后者再经变态反应，形成4个精子。 简述精卵融合受精的主要过程：1穿入卵丘和放射冠。精子头部质膜上的透明质酸酶可水解卵丘颗粒细胞之间的连接结构，使得卵丘细胞松散，精子在尾部摆动的作用下穿透卵丘，到达透明带。2识别与结合卵母细胞：精子质膜上ZP3受体与卵母细胞ZP上的ZP3结合，在精子尾部供能下，粘附于卵子，同时诱发顶体反应。随后，精子质膜上的ZP2受体与卵子ZP2结合，使精子紧密结合于卵子上。3顶体反应：精子顶体释放的酶溶解透明带等外围结构（顶体酶溶解透明带，透明质酸酶松解卵丘，酸性蛋白酶溶解放射冠，芳香基硫酸酯酶溶解卵黄膜等）。4穿越ZP和卵黄膜：顶体反应释放的酶的酶解及精子尾部的机械运动，使得精子最终进入卵母细胞内部。5精卵融合：精子进入卵质后，除染色质结构外，其他结构降解，随后染色质解凝集，DNA重新与组蛋白结合，并逐渐形成雄原核。6卵子激活：随着精子的入卵，卵母细胞恢复减II分裂，激活卵母细胞的分裂及其他反应，其中以皮质反应所引发的透明带反应及卵黄膜反应，在防止多精受精过程中起重要作用。7原核的形成：卵子激活后的结果之一便是彻底完成减数分裂的卵母细胞细胞核逐渐形成雌原核，然后雌雄原核行DNA复制并相互靠近并发生膜融合，至此受精结束。 简述缩短细胞一代时间里的潜伏期的常用方法：增大细胞密度；选择合适的培养对象（幼小动物、传代细胞、胚胎细胞）；创造良好的培养条件（培养基、血清浓度、合适的瓶壁底物）；培养基中额外添加促粘附物质（纤粘连蛋白） 什么是BSS？有何作用？在实验室操作中BSS主要用于那些操作？BSS是指平衡盐溶液；生理作用为细胞提供生理性渗透压和pH值的生长、生活环境；常用于洗涤组织、细胞及配制胰酶及培养基时作为溶剂。 什么是完全培养基？其中血清的主要作用是什么？血清使用之前为什么要进行灭活处理？如何进行？完全培养基=合成培养基＋血清（10-20%）＋双抗；血清主要作用是促进培养细胞的生长、贴壁、分裂；主要为灭火补体，方法为56℃30min水浴。 胰酶在原代培养和传代培养中的消化对象和消化方法分别是什么？原代培养的消化对象为活体组织块，方法一般为胰酶37摄氏度消化30min（视消化对象有所不同，但总的时间比较长），每隔5min摇匀一次；传代消化对象为贴壁细胞，方法为室温或37℃消化2-3min，直至镜下由细胞变圆或瓶壁上出现空洞为止。 细胞培养之前为什么要进行细胞计数？细胞常用培养密度大约是多少？为了保持合理的细胞密度，密度太高需频繁换液容易污染，且有贴不了壁的细胞会