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? 浙江大学医学院附属第一医院 陈亚岗 艾滋病病毒示意图 中国艾滋病：撞向冰山的巨轮 “低流行”标签有问题 中国目前感染艾滋病病毒的人数已超过150万 云南等7个省份目前已经亮起红灯，出现艾滋病的局部流行 流行的危险因素依然存在，如艾滋病知识的普遍缺乏、大量的流动人口、性别失衡、贫困等 数字反映出来的大不过是冰山一角 中国艾滋病：危险的泰坦尼克号 爱滋病的来源 1959年前的血标本已发现HIV病毒 很可能由于猎食猿猴感染，从非洲 黑猩猩的SIV转化而来。 西非 临床表现 急性感染 无症状感染 持续性全身淋巴结肿大综合征 艾滋病 1、全身性症状 2、神经系统症状 3、严重机会性感染 4、继发性肿瘤 5、并发其他疾病 HIV感染可通过多种途径检测 直接检测病毒或其组成部分蛋白和核酸 检测人体HIV免疫反应——HIV特异性抗体 从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-3个月，有一小部分HIV感染者出现延迟反应 免疫标记多类CD和免疫因子 物理观测和检测（图片） HIV感染后抗原和抗体的变化及其与疾病关系 HIV感染人体后出现一过性病毒血症，6-8周后血清抗体阳转，病毒滴度降低，在随后的5-8年无症状带毒期里HIV抗体一直存在，但病毒难查到。进入AIDS期后血浆中病毒再次出现。 故诊断HIV感染多数时间用抗体检测诊断，极早期（窗口期）用抗原检测。 病毒感染的诊断 HIV初次感染人体后，同其他病毒一样，会出现一段短暂的病毒血症。 几周后病人血清阳转，最早出现的是对HIV核心蛋白p24的抗体，随后包膜蛋白gpl20、gp41的抗体，以及多聚酶蛋白组的p64和p31的抗体也陆续出现。 当病情发展到艾滋病出现时，血清中病毒再次出现，而抗核心蛋白p24和p55的抗体滴度明显下降，最终消失，但其他抗体仍存在。 病毒感染的诊断 由此可见，诊断HIV感染的极早期只能靠抗原检测，而在感染后的大多数时间，则可用简单的血清学方法来诊断，但要注意抗体的类别和滴度。 病毒感染的诊断 方法（1）－－病毒分离 在HIV分离中，多是用病人的血清或其他体液接种对HIV易感的细胞，患者淋巴细胞。在分离过程中，定期检测培养细胞上清中的逆转录酶活性或细胞中有无病毒抗原出现。若出现阳性反应，还需经蛋白质印迹(Westernblot)证实，并确定分离到的病毒的型别。 病毒感染的诊断 方法（2）－逆转录酶测定 HIV是一种逆转录病毒，即其病毒颗粒中带有能以RNA为模板合成DNA的逆转录酶。人的所有细胞中均无这类酶，因而在某人的血清或其他体液中测定到转录酶活性，再结合流行病学或临床资料及排除仅在世界极少数人群中流行的HTLV-1和HTLV-2(其他两种人逆转录病毒)感染，即可诊断为H1V感染。 核酸检测 HIV核酸检测有定性和定量两类，定性检测用于HIV感染的辅助诊断。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量涵盖所有的或常见的毒株，也可使用复合引物。 定性检测 通常根据扩增产物的电泳图像判定结果，阳性结果还要进行核酸序列测定来确定。 HIV核酸检测阴性, 只可报告本次实验结果阴性，不可排除HIV感染。 HIV核酸检测阳性, 可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断。 报告核酸定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。  定量检测 定量检测常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。目前常用的HIV RNA定量测定方法有逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）等，这几种进口试剂盒的最低检测限为20-50拷贝/毫升 按照仪器读数报告结果，应注明使用的试验方法、样品种类和样品量。 测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。注意低于最低检测限的结果不能排除HIV感染。 应附上仪器打印的数据。 样品的采集和处理 用于HIV核酸检测的样品有全血、血浆、组织和其他分泌物，有时还包括生物制品。 采集样品应避免微生物和核酸污染。避免RNA酶造成的降解，采样后4-8小时内处理。处理后的样品应分装、标记，冻存于-20℃以下，RNA类样品需要类样品应冻存于-80℃。 应在2-8℃条件下运送。特殊情况下，可以用特快专递形式投寄，但必须将盛样品的试管包扎好，保证不会破碎和溢漏。 常用的病毒载量测定方法 ? 分枝DNA信号放大系统 HIV-1 Quantiplex ( bDNA ) ? 逆转录PCR系统 Amplicor HIV-