实验三 培养基的制备与灭菌归纳.pptVIP

实验三 培养基的配制、分装和灭菌 . * 一、实验目的 明确培养基的配制原理 通过对基础培养基的配制，掌握配 制培养基的一般方法和步骤 . * 培养基是人工按一定比例配制的供微生物 生长繁殖和合成代谢产物所需要的 营养物质的混合物 培养基的原材料：碳源、氮源、无机盐、 生长因素、水 二、基本原理 . * 根据微生物的种类和实验目的不同，培养基有不同的种类 按成分：天然培养基，合成培养基，半合成培养基 按物理状态分：固体培养基，半固体培养基， 液体培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 . * 三、实验器材与试剂 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 1mol/L NaOH、1mol/L HCl 仪器或其它用具：三脚架、培养基分装器、 天平、牛角匙、 高压蒸汽灭菌锅等 . * 称量→溶化→调pH →过滤→分装→加塞 →包扎→灭菌→搁置斜面 四、操作步骤 . * 1）称量：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧 杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热 水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随 后放人热水中，牛肉膏便会与称量纸分离，立即取 出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2）加热溶化：在烧杯中加入少于所需要的水量，并用玻棒 搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需 量。若配制固体培养基，则加入琼脂再加热 融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底 或溢出，最后补足所失的水分。 . * 3）调pH：检测培养基的pH，若偏酸，可逐滴滴加1mol?L-1NaOH 边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用1mol?L-1HCl进行调节。 pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过 头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4）过滤 趁热过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结 果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。 . * 固体分装 5）分装：披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶 口上面造成污染 分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜 面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。 半固体培养基以试管高度的1/3为宜。灭菌后垂直 待凝 半固体 液体分装 试管 三角烧瓶 试管 三角烧瓶 1/3 1/4 1/2 1/5 1/2 . * 6）加塞：试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制 作的棉塞。以阻止外界微生物进入培养，并保 持良好通气性 7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防 灭菌时冷凝水沾湿棉塞 8）灭菌：将上述培养基以0.103MPa，121℃， 20min高压蒸气灭菌 9）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防 斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻 棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面 长度以不超过试管总长的一半为宜。 . *