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整合型异源蛋白的表达 DNA 体内重组的基本原理 同源序列依赖型的体内重组： 同源整合 ori 目的基因 同源区域 标记基因 整合位点 染色体 DNA 整合型异源蛋白的表达 DNA 体内重组的基本原理 同源序列依赖型的体内重组： 同源交换 ori 目的基因 同源区域 标记基因 交换区域 染色体 DNA ori 标记基因 + 蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建 无论是在真核生物还是在原核细胞中，重组目的蛋白表 达后都会面临被降解的命运，其稳定性甚至还不如半衰期较 短的受体细胞内源性蛋白质。 在大多数情况下，重组目的蛋白的不稳定性可归结为对 受体细胞蛋白酶系统的敏感性。然而越来越多的实验表明， 重组目的蛋白在受体细胞内的半衰期可以通过蛋白序列的人 工设计以及受体细胞的改造加以调整和控制。 包涵体型异源蛋白的表达 以包涵体形式表达目的蛋白的优缺点 包涵体表达形式的缺点： 以包涵体形式表达的重组蛋白丧失了原有的生物活性，必须通 过有效的变性复性操作，才能回收得到具有正确空间构象（因而具 有生物活性）的目标蛋白，因此包涵体变复性操作的效率对目标产 物的收率至关重要。然而，这也是一个技术难题，尤其当目标蛋白 分子中的 Cys 残基数目较高时，体外复性蛋白质的成功率相当低， 一般不超过 30% 包涵体型异源蛋白的表达 以包涵体形式表达目的蛋白的操作 如果未进行特殊设计（如分泌型表达或融合型表达），