统计学分析解析方法确定微波法提取佛手多糖的最佳工艺.docVIP

分析方法确定微波法提取佛手多糖的最佳工艺 佛手（bergamot）又名佛手柑，学名Citrus Medica L. var.sarcodactylis （Noot） Swingle，为芸香科柑桔属香橼的变种，长 \o "" 论文联盟 www.LWlM.com绿小乔木或灌木[1]，是传统的名贵中药，其花、叶和果实均可入药，在 \o "" 临床 \o "" 应用上具有悠久的历史。中医认为佛手具有舒肝理气、止咳化痰、和胃止痛等功效，常用于缓解胃腹胀痛和咳嗽气喘等症状。近年来研究发现，佛手多糖能提高机体免疫功能，在抗肿瘤和抗病毒方面具有广阔的应用前景[2]。因此，越来越引起人们的重视。　　试验设计是考虑如何安排多因素多水平的试验，能合理而高效地获得所需要的试验数据，并用相应的方法分析这些数据，以确定哪些因素的影响是主要的，各因素用什么水平搭配起来对试验的指标是最佳的。试验设计在改进产品配方、降低原料和能源的消耗、提高产品的产量和质量等方面具有广泛的应用。本文以佛手多糖含量为指标，以提取次数、浸提时间、提取功率、料液比为因素，利用正交试验和方差分析方法，通过微波提取，对佛手多糖的提取工艺进行系统研究，确定最佳提取工艺，为合理利用和开发佛手药物资源提供科学依据。　　1 仪器与药品 　　仪器：U1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），XH-200A型微波萃取仪（北京鸿鹄科技 \o "" 发展有限公司），电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。　　药品：佛手（长春药材公司），苯酚（开原化学试剂厂）、葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号：1108332200302，供含量测定用）、浓硫酸（胶州市富田化工有限公司）、乙醇（北京化工厂）等，均为分析纯试剂。　　2 方法与结果　　2.1 方法[3-5]　　2.1.1 佛手多糖的测定方法 以葡萄糖为标准品，采用硫酸-苯酚比色法。　　2.1.2 佛手多糖样品液的制备 精密称取1.0 g干燥至恒重的佛手，分别用95%的乙醇和80%的乙醇回流脱脂除糖，置于微波萃取仪内加水提取，将提取液合并，定容于500 mL容量瓶中，即得佛手多糖样品液。　　2.1.3 标准样品液的制备 精密称取14.71 mg恒重干燥的无水葡萄糖，放入100 mL容量瓶中用水溶解，即得147.1 μg/mL标准样品液。　　2.1.4 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准样品液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中，依次加入1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 mL蒸馏水，再各加1.0 mL 6%苯酚试剂，混匀，精密加入5 mL浓硫酸，振摇后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，立即转入冷水浴中冷却至室温，以蒸馏水为空白，在490 nm波长处测定吸光度，以浓度C为自变量，吸光度A为因变量，进行一元线性回归，得到标准曲线A = 0.040 8C + 0.211，算得相关系数r = 0.998 5，可见两者有高度相关性。　　2.1.5 佛手多糖样品液的测定 精密吸取佛手样品液1.0 mL，按“2.1.4”项下标准曲线的绘制方法操作。　　2.2 单因素试验的结果　　2.2.1 提取次数对多糖得率的影响 选择提取时间8 min，提取功率550 W，料液比1∶20，提取次数分别为1、2、3、4、5次，多糖得率结果见图1。 由图1可见，提取次数2次与3、4、5次相比，样品多糖得率相差不大，故选择2次。　　2.2.2 提取时间对多糖得率的影响 提取次数2次，提取功率550 W，料液比1∶20，提取时间分别为4、6、8、10、12 min，多糖得率结果见图2。　　　图2 提取时间对多糖得率的影响　　 \o "" 论文联盟 www.LWlM.com　　由图2可见，当提取时间达到8 min时，多糖得率达到最大。故选择提取时间8 min。　　2.2.3 微波功率对多糖得率的影响 提取次数2次，提取时间8 min，料液比1∶20，提取功率分别为250、400、550、700、850 W，多糖得率结果见图3。　　　　图3 微波功率对多糖得率的影响　　　　由图3可见，当微波功率达到550 W时，多糖得率达到最大值。故选择微波功率550 W。　　2.2.4 料液比对多糖得率的影响 提取次数2次，提取时间8 min，微波功率550 W，提取料液比分别为1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25，多糖得率结果见图4。　　由图4可见，当料液比为1∶20时，多糖得率达到最大值。故取料液比1∶20。　　2.3 佛手多糖提取条件的优化设计与 \o "" 统计分析　　2.3.1 佛手多糖提取条件的优化设计 在单因素试验的基础上，以提取时间A（min）、