四 目的基因的检测与表达产物的测定讲课稿.pptVIP

基因工程的基本操作程序;基因工程的概念;基因工程基本操作的四个步骤;为什么非要有载体和目的基因一同进入受体细胞呢？;前面三个步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。 检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒，并被转入受体细胞后，就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。; 标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上，要导入都导入，要表达则都会表达。一般标记基因的DNA序列是已知的，若选用抗氨苄青霉素基因，则可在目的基因导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞，若无异常，则抗氨苄青霉素已合成，说明基因已得到表达。;基因工程的概念;1.检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。; 两种生物的互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链。即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补配对进行。因此，当用探针与转基因生物的目的基因杂交时，如果出现杂交带（用特殊的显影装置能看到），则说明目的基因已经插入受体细胞的染色体DNA中。;2.检测目的基因是否转录出了mRNA 这是检测目的基因是否发挥功能作用的第一步。;3.检测目的基因是否翻译成蛋白质; 如：一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后， 是否具有了抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的 接种实验，观察害虫的存活情况或植物的患病情况 以确定是否具有抗性及抗性的程度。 又如：有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较，以确定转基因产品的功能中否与天然产品相同，甚至超过天然产品。;1.分子检测;归纳步骤;①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因;归纳: 基因工程的基本操作程序;1.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？;（2012福建）32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。;（2012福建） 32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。;（３）研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图２。据图分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起的。;（5）基因工程中除质粒外，　　　　　和　　 　　　　也可作为运载体。 ;（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。 （2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上 抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有 四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大 肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如 果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已 进入其中。 （4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎 后从中提取β-珠蛋白。 ;“汉水丑生的生物同行”超级群大型公益活动：历年高考题PPT版制作。本课件为公益作品，版权所有，未经允许不得擅自修改或用于任何形式的商业用途。2012年1月15日，汉水丑生标记。;请据图回答： （1）A过程需要的酶有__________________________。 （2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是 。;（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_________。 （4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用 作为探针。 ;（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。