蛋白激酶Cα在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用.doc

生理学报Ａ嘲Ｐ协面妞妇跏泐，Ｆｅｂｍａｒｙ２５，２００８，６０（１）：１０５?１１２ ｈｎｐ：，／ｗｗｗ．ａｃｔａｐｓ．ｃ咖．ｃｎ１０５墨圈 蛋白激酶Ｃ仅在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用 陈雅隽，申景岭，冯秀清，单智焱，阎晓飞，董建将，钟淑琦，雷蕾’ 哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室，哈尔滨１５００８ｌ ， 摘要：为了观察蛋白激酶ｃａ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｃｏｃ，ＰＫｃａ）在昆明白小鼠受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段的亚细胞定位和致密化进程中的表达变化，本实验利用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法，对受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段ＰＫＣ０【的表达进行了定位观察，并利用ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ对三组胚胎致密化进程中ＰＫＣ０ｃ的表达进行定量分析。结果显示，ＰＫＣ０【在上述三组胚胎发育的２．细胞期至囊胚期均有表达，虽然不同胚胎ＰＫＣ０ｃ的分布在同一发育阶段存在差异，却表现出在各胚胎期主要分布于卵裂球核染色质内，以及在胚胎致密化开始，ＰＫｃ０【在卵裂球连接处发生重新分布的共同特点。此外，三组胚胎ＰＫＣａ在致密化进程中的表达呈升高趋势，即致密化后的表达高于致密化前。结果表明，ＰＫｃ戗对胚胎致密化的调节具有重要作用，其在８．细胞，４．细胞期的重新分布是胚胎进入桑椹胚期的必然事件，是胚胎致密化的前提，同时伴随蛋白表达增多。此外，ＰＫＣ仅在囊胚期发生了植入前的第二次重新分布。ＰＫＣ０‘在三组胚胎各发育阶段表达情况各不相同，它对小鼠胚胎发育的影响体现在整个早期发育阶段。ＰＫＣ伐在小鼠受精卵早期发育阶段的两次重新分布可能与在致密化开始时启动的细胞黏附事件存在某种必然联系。 关键词：蛋白激酶Ｃ０【；孤雌胚胎；四倍体胚胎；致密化 中图分类号：Ｒ３２ｌ ＬｏｃａｔｉｏｎａｎｄｒｏｌｅｏｆｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ仅ｉｎｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｔｅｔｒａｐｌｏｉｄｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｅｍｂｒｙｏＩｌｉｃｄｅＶｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｍｏｕｓｅ ＣＨＥＮＹａ—Ｊｕｎ，Ｓ｝玎三ＮＪｉｎｇ—Ｌｉｎｇ，ＦＥＮＧ）（ｉｕ—Ｑｉｎｇ，ＳＨＡＮ ＺＨＯＮＧＳｈｕ—Ｑｉ，ＬＥＩＬｅｉ＋２艋一Ｙ锄，ＹＡＮ）（ｉａｏ—Ｆ研，ＤＯＮＧＪｉ肌?ＪｉａＩｌｇ， Ｄ印ｄ砌竹绷ｆＤ，胁ｓ幻妇ｙ口，耐西柏唧ＤｆＤ∥，日ａ而拥胁历阳ＺＣ胁眈憎ｆ钐日ａ而加Ｊ５Ｄ嬲Ｊ，国砌 Ａｂｉｈ粥ｔ：ｎ恤ｉｌＩｋｉｎａＳｅＣ（ＰＫＣ）ｉｓａｃｒｉ吐ｃａｌＩｎｏｌｅｃｕｌｅｉｎｃｅＵｕｌ盯ｓｉ割Ｉａｌ咖ｓｄｕｃｔｉｏｎｉＩｌｍａＩ：ｎｍａｌｓ．Ｉｔｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｍ锄ｙｂｉｏｌｏ百ｃａｌｐｒｏｃｅｓ∞ｓ ｐｏｌ撕哆ｒｅｇＩｌｌａｔｉｏｎ．ｎｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙａｉｍｅｄ ｔｏ０ｂｓｅｒｖｅｔｈｅｌｏｃａｌｉ∞ｏｆＰＫＣ仪，粕ｉｍｐｏｒｔ锄ｔｉｓｏｚｙｍｅｏｆＰＫＣ，ｉｎｆ色ｎｉｌｉｚｅｄ，ｐｍｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ锄ｄｔｅｔｍｐｌｏｉｄｐｒｅｉｍｐｌｌｕｌ础ｏｎｅｍｂｒｙｏｓ，ｉｎｅＩＩＩｂｒｙｏｎｉｃｄｅｖｅｋＩｐ眦吐ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｎｕｃｌｅａｒｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｃｅＵｃｙｃｌｅ喇ｕｓｎＩｌｅｎｔ锄ｄｃｅｕｕｌａｒ扑ｄｃｏｍｐａｆｅｔｔ圮ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＫＣ０‘ｄｕｒｉｎｇｅｎｌｂｒｙｏｎｉｃｃｏＩｎｐａｃｔｉｏｎｉｎＫｕｎＩＩｌｉｎｇＩＩｌｉｃｅ．ＴｈｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆＰＫＣ０‘ｗａｓｄｅｔｃｃｔｅｄｂｙ ｔｏｉ咖ｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｌａｓｅｒｃｏｎｆ６ｃａｌＩｎｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ＷｅｓｔｅｍｂｌｏｔｗａｓｐｅｒｆｏｎＩｌｅｄ ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎｉｎ廿ｌｅｑｕａｎｔｉｆｙＰＫＣａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｏｒｅｍｂｒｙｏｎｉｃｔｔｌ陀ｅｌ【ｉｎｄｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓ．Ｉｎｔｔｌｅｅｘｐｅｒｉｌ＿ｎｅｎｔ，ｆｅｆｔｉｌｉｚｅｄｅｍｂｒｙｏｓｗｅｒｅｎｕｓｈｅｄｆ如ｍｏｖｉｄｕｃｔｕｔｅｍｓａｔ４５，５２，６９，７６锄ｄ９３ｈａ血ｅｆｉＩｌｊｅｃｔｉ∞ｏｆｈｕＩｍｎｃｈｏｒｉｏＩｌｉｃｇｏｎａｄｏ仃ｏｐｔｌｉｎ（ＩｌＣＧ）；ｐａｎＩＩｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓｗｅｒｅ ｆｏｒ６ｈ；粕ｄ ｆｏｒｃｏｌｌｅｃ倒ｂｙＳｒ（：１２ａｃｔｉＶａｔｉｏｎｏｆｏｏｃｙｔｅｓａｔｔｅｎ印ｌｏｉｄｅＩＩＩｂｑｏｓｗｅｒｅｐｆｏｄｕｃｅｄｂｙｅｌｅｃ仃ｏｍｓｉｏｎｏｆ２一ｃｅＩｌｅｍｂｑｏｓ．Ｅｍｂｒｙｏｓｅｍｂｒｙｏｓ卸ｄｍｏｍｌａｗｅｆｅｌｙｓｅｄｆｏｒｗｅｒｅｎｘｅｄｄｉ仟ｅｒｅｎｔｄｅＶｅＩｏｐｎ屺ｎ诅ｌｓ仨唱ｅｓｉｍ哪ｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｍｓｔａｉｌｌｉｎｇ．８．ｃｅｌＷ．ｃｅｎＷｅｓｔｅｍｂｌｏｔ．ＴｈｅｒｅｓｕｈｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＫＣ０ｃｈａｄ ａｔｓｉＩｎｉｌａｒｌ