第二章-紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用.pptVIP

第二章 紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用 一、紫外-可见分光光度法简介 1、什么是紫外-可见分光光度法？ 根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。 2、什么是吸收曲线（吸收光谱）？ 描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而变的函数关系曲线。 具体做法：让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收曲线。 吸收光谱的产生：运动的分子外层电子→吸收外来辐射→产生电子能级跃迁→分子吸收谱 3、吸收曲线对物质定性、定量的基础及方法？ （1）定性基础：吸收曲线上的λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状，决定于物质的性质，其特征随物质结构而异，所以它是物质定性的依据。（P171） 不同物质为什么会在特定的波长产生吸收峰？ ——不同物质的结构不同或者说其 分子能级的能量(各种能级能量总和) 或能量间隔各异，因此不同物质将 选择性地吸收不同波长或能量的外来 辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。 （P164-166:电子跃迁的种类） （2）定性分析方法： ?与标准品、标准谱图对比 ?对比吸收光谱特征数据 ?对比吸收度的比值 （3）紫外-可见光谱定性分析的局限？ 有机化合物紫外吸收光谱反映结构中生色团和助色团的特性，不完全反映分子特性：紫外吸收光谱只有2～3个较宽的吸收峰，具有相同生色团的不同分子结构，有时在较大分子中不影响生色团的紫外吸收峰，导致不同分子结构产生相同的紫外吸收光谱——紫外吸收光谱相同，两种化合物有时不一定相同。 例如：甲苯与乙苯：谱图基本相同 （4）紫外光谱用于有机化合物结构辅助解析 a.可获得的结构信息 1）200～800nm 无吸收峰。脂肪族碳氢化合物、胺、醇、卤代烃等，不含双键或环状共轭体系，且无醛、酮或溴、碘等基团。 2） 270～350 nm有弱吸收峰（ε=10～100）而无其它强吸收峰则说明仅含非共轭的具有n 电子的生色团发生的n→π* 跃迁（R带） 3） 250～300 nm 有中等强度的吸收峰（ε=200～2000）,芳环的特征吸收（具有精细结构的B带）。 4） 210～350 nm有强吸收峰（ε≥104），表明含有两个双键的共轭体系（K）带。共轭二烯：K带（～230 nm）；α,β-不饱和醛酮：K带～230 nm，260nm～350 nm有强吸收峰——3～5个双键的共轭体系。 b.光谱解析注意事项 1）确认λmax，并算出logε，初步估计属于何种吸收带； 2）观察主要吸收带的范围，判断属于何种共轭体系； 3）pH值的影响 加NaOH红移→酚类化合物，烯醇。 加HCl蓝移→苯胺类化合物。 4）识别未知物分子中可能具有的生色团、助色团并估计共轭程度。 (5)定量基础：朗伯-比尔定律和吸光度加和性 朗伯-比尔定律： 当一束光强度为I0的单色光通过浓度为c、厚度为L的溶液时，溶液对光的吸收度与与溶液浓度及液层厚度成正比，公式表示为：A=KLc (6)朗伯-比尔定律中需注意的几个问题： K称为吸收系数，在单色光波长、浓度、溶剂、温度一定时，K为常数，K常用摩尔吸收系数ε表示； 朗伯-比尔定律只适用于单色光、溶液，仪器分光系统和待测液状态都会影响定量准确性； (7)朗伯-比尔定律的偏离及其原因？ 根据朗伯-比尔定律，在同一条件下进行测定，A-c曲线应为通过原点的直线，但实际工作中直线常常发生弯曲，这称为朗伯-比尔定律的偏离。 原因： 吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质不均匀引起；吸光物质不稳定引起。 摩尔吸收系数ε： 1mol/L浓度的溶液，液层厚度为1cm时的吸收度。 强吸收：ε＞104； 中等强度吸收：102 ＜ ε ＜ 104； 弱吸收： ε＜102； 摩尔吸收系数不能直接测得？ (8)吸光度加和性： 在多组分共存的溶液体系中，体系的总吸收度等于各组分吸收度之和，在任意波长下，共存的多组分中各组分遵守朗伯-比尔定律。这是多组分定量的基础。 A总=A1+A2+……+Ai =ε1bc+ ε2bc+……+ εibc (9)定量分析方法： a、单组分定量方法 1）标准曲线法 ?? 先通过全波段扫描，根据吸收曲线特征选择入射波长； ?? 配制该物质不同浓度的标准溶液，测定其在入射波长处对应吸光值； ?? 得到标准曲线后，通过标准曲线法测定待测试样的浓度。 2）标准对比法： 该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx 该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律，且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。 b. 多组分定量方法